【??參數(shù)信息】
英文名稱:Total Nitric Oxide Colorimetric Assay Kit
生產(chǎn)廠商:西安強(qiáng)化生物科技
【簡(jiǎn)單概述】
一氧化氮(Nitric Oxide, NO)是一種活性基,在許多關(guān)鍵生理功能中發(fā)揮重要作用。
一氧化氮,一氧化氮合酶(NOS)催化精an酸的氧化產(chǎn)物,參與宿主防御和發(fā)育、調(diào)節(jié)蛋白活化、以及與功能生物分子之間的直接共價(jià)相互作用。
一氧化氮生成后迅速代謝生成亞硝酸鹽(Nitrite)和硝酸鹽(Nitrate),兩種首要的、穩(wěn)定的和非揮發(fā)性的裂解產(chǎn)物,通過(guò)對(duì)這兩種產(chǎn)物的測(cè)定能間接反映樣本內(nèi)的一氧化氮水平。
總一氧化氮檢測(cè)試劑盒(顯色法),利用兩步法測(cè)定總一氧化氮水平,先用硝酸鹽還原酶將硝酸鹽還原為亞硝酸鹽,第二步再用經(jīng)典的Griess reagent,對(duì)亞硝酸鹽進(jìn)行定量測(cè)定,從而推算出總一氧化氮含量。
由于本試劑盒使用的是NADPH依賴的硝酸鹽還原酶,高濃度的NADPH會(huì)干擾后續(xù)檢測(cè),因此,試劑盒使用乳酸脫氫酶(LDH)來(lái)清除NADPH,確保檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。
本試劑盒以亞硝酸na為標(biāo)準(zhǔn)品,通過(guò)優(yōu)化的檢測(cè)體系,檢測(cè)下限達(dá)2μM,且在2~80μM范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。
本試劑盒不僅能檢測(cè)細(xì)胞、組織或培養(yǎng)液中的一氧化氮含量,還能檢測(cè)血清、血漿或尿液中的一氧化氮含量。
檢測(cè)下限通常為1.35–2 μM,線性范圍覆蓋2–100 μM。
細(xì)胞培養(yǎng)上清液、血清、血漿、尿液、組織勻漿液等。
注意:高蛋白樣本(如血清)需預(yù)先煮沸離心去除沉淀;尿液需稀釋10–50倍;避免使用含肝素抗凝的血漿或含高濃度硝酸鹽的培養(yǎng)液(如RPMI 1640)。
還原劑(如DTT、巰基乙醇)會(huì)抑制硝酸鹽還原酶活性,需避免使用。
普通NO試劑盒僅檢測(cè)亞硝酸鹽(NO2?),而總NO試劑盒通過(guò)還原酶將硝酸鹽(NO3?)轉(zhuǎn)化為NO2?,更全面反映總NO水平。
若僅需粗略測(cè)定NO相對(duì)量,可選普通顯色法試劑盒;需測(cè)定細(xì)胞內(nèi)NO時(shí),建議使用熒光探針(如DAF-FM DA)。
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