【??參數(shù)信息】
英文名稱:Ar 1193 Electrocompetent Cell 農(nóng)桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)細胞
中文名稱:Ar 1193農(nóng)桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)細胞
形態(tài)與狀態(tài):液態(tài)懸浮細胞,經(jīng)特殊工藝制備成電轉(zhuǎn)感受態(tài)。
【簡單概述】
發(fā)根農(nóng)桿菌(Agrobacterium rhizogenes)是根瘤菌科農(nóng)桿屬的一種革蘭氏陰性土壤細菌,能夠侵染大多數(shù)雙子葉植物和少數(shù)單子葉植物以及個別裸子植物。
起關鍵作用的是其攜帶的Ri質(zhì)粒,含有負責發(fā)根自主性生長和冠癭堿合成的基因。結(jié)構(gòu)上與Ti質(zhì)粒類似,主要有致毒區(qū)(Vir),T-DNA區(qū)以及冠癭堿合成功能區(qū)等。
根據(jù)合成冠癭堿的不同,Ri質(zhì)粒分為4種類型:1)甘露堿型;2)黃瓜堿型;3)農(nóng)桿堿型;4)米奇矛型。
發(fā)根農(nóng)桿菌菌株Ar 1193含pRi1193農(nóng)桿堿型Ri質(zhì)粒,具有廣泛的宿主范圍(豆科,茄科等),同時具有抗性。
Ar 1193農(nóng)桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)細胞適合大質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化。
基因型為Agrobacterium rhizogenes (carbR,strR,rifR) pRi1193 (agropine type),經(jīng)pCAMBIA2301質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率>105 cfu/μg DNA。
【注意事項】
1) 感受態(tài)細胞應保存在-80℃,不可反復凍融和放置時間過長,以免降低感受態(tài)細胞的轉(zhuǎn)化效率。
2) 整個轉(zhuǎn)化操作,嚴格根據(jù)相應溫度及無菌條件要求進行。
3) 加入質(zhì)粒的體積不應大于感受態(tài)體積的1/10。質(zhì)粒不純或存在乙醇等有機物污染,會導致轉(zhuǎn)化效率急劇下降。質(zhì)粒增大一倍,轉(zhuǎn)化效率下降一個數(shù)量級。
4) 為確保轉(zhuǎn)化效率,整個操作過程應盡量輕柔,并保持低溫。
5) 電轉(zhuǎn)感受態(tài)細胞中不可混入氣泡,轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)??上鄳獪p少最終涂板用量。
6) 平板上克隆密度過大時,由于營養(yǎng)不足,克隆生長變慢,菌落變小。為獲得大菌落,應減少質(zhì)粒用量
7) 為了保證轉(zhuǎn)化效率,發(fā)根農(nóng)桿菌的培養(yǎng)務必使用TY培養(yǎng)基。
8) 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
【相關試劑】
Cytochromes C(Bovine Heart)
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