【??參數(shù)信息】
英文名稱(chēng):DyLight 649 labeled Lycopersicon Esculentum
中文名稱(chēng):DyLight 649標(biāo)記的番茄凝集素
糖特異性:[GlcNAc]1-3, N-Acetylglucosamine
生產(chǎn)廠商:西安強(qiáng)化生物科技
【簡(jiǎn)單概述】
DyLight 649標(biāo)記的番茄凝集素是一種穩(wěn)定的單亞基糖蛋白,由番茄提取的凝集素(LEL/TL)與遠(yuǎn)紅光熒光染料 DyLight 649 共價(jià)偶聯(lián)而成。
其糖類(lèi)組分含約 85%半乳糖,在溶液中可能形成多聚體。
熒光特性:激發(fā)波長(zhǎng) 655 nm,發(fā)射波長(zhǎng) 670 nm,屬于遠(yuǎn)紅光范圍,適用于雙標(biāo)實(shí)驗(yàn)。
糖結(jié)合特異性:主要識(shí)別 [GlcNAc] 1,3-N-乙酰葡萄糖胺。
可結(jié)合 血型糖蛋白和糖蛋白,但對(duì)血型無(wú)特異性。
【實(shí)驗(yàn)步驟(綜合操作流程)】
濃度:推薦工作濃度為 5–20 µg/mL(需用適當(dāng)緩沖液稀釋?zhuān)?/span>
沉淀處理:若長(zhǎng)期儲(chǔ)存(2–8°C)后出現(xiàn)沉淀,需在 37°C 加熱溶解后再使用。
儲(chǔ)存條件:避光保存于 2–8°C,穩(wěn)定期約6個(gè)月。
單次注射 200 µL DyLight 649-LEL 溶液(濃度按需調(diào)整)。
讓凝集素在血管內(nèi)循環(huán) 15分鐘。
取出目標(biāo)組織(如腦、腫瘤),固定于 2–4% 多聚甲醛(PFA)。
將稀釋后的DyLight 649-LEL(5–20 µg/mL)滴加于切片,覆蓋組織。
短時(shí)孵育:室溫避光孵育30分鐘至1小時(shí)。
深度標(biāo)記(厚樣本) :避光孵育 5天,中途翻轉(zhuǎn)樣本確保滲透均勻。
洗滌:用 0.2% PBST(含Tween-20的PBS) 洗滌3次,每次1小時(shí),去除未結(jié)合凝集素。
固定增強(qiáng):對(duì)厚組織建議用 4% PFA后固定24小時(shí),提高標(biāo)記穩(wěn)定性。
進(jìn)行其他標(biāo)記物染色(如SSEA-1、DDX4抗體):
冰上避光孵育一抗(1:100稀釋?zhuān)?小時(shí)。
洗滌后加熒光二抗(如Alexa Fluor 568,1:200稀釋?zhuān)┓跤?0分鐘。
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