【??參數(shù)信息】
英文名稱:Annexin V-FITC/PI Apoptosis Detection Kit,Annexin V-FITC/PI細胞凋亡檢測試劑盒
激發(fā)/發(fā)射波長:490/530 nm
【簡單概述】
Annexin V-FITC/PI細胞凋亡檢測試劑盒通過雙染色法(Annexin V-FITC與碘化丙啶PI)檢測細胞凋亡,結合流式細胞術或熒光顯微鏡進行分析。
其核心功能是通過檢測細胞膜表面磷脂酰絲an酸(PS)的外翻和細胞核的染色狀態(tài),區(qū)分正常細胞、早期凋亡細胞、晚期凋亡細胞及壞死細胞。
【染色步驟】
a)對于貼壁細胞:小心收集細胞培養(yǎng)液到一干凈離心管內(nèi)備用。
用不含EDTA的yi酶消化細胞至細胞可以被輕輕用移液管或槍頭吹打下來時,加入前面收集的細胞培養(yǎng)液,吹打下所有的貼壁細胞,并輕輕吹散細胞。再次收集到離心管內(nèi)。
對于特定的細胞,如果無法離心至管底,可以適當延長離心時間或稍稍加大離心速度。
小心吸除上清,可以殘留約50µl左右的培養(yǎng)液,以避免吸走細胞。
加入1ml 4℃預冷的PBS,重懸細胞,再次離心沉淀細胞,小心吸除上清。
b)對于懸浮細胞:1000rpm離心5min沉淀細胞。
對于特定的細胞,如果無法離心至管底,可以適當延長離心時間或稍稍加大離心速度。
小心吸除上清,可以殘留約50µl左右的培養(yǎng)液,以避免吸走細胞。
加入1ml 4℃預冷的PBS,重懸細胞,再次離心沉淀細胞,小心吸除上清。
【2】用去離子水按照1:3稀釋結合緩沖液到1×,比如,5ml結合緩沖液(4×)加入15ml去離子水。
【3】用結合緩沖液(1×)重新懸浮細胞并調(diào)整濃度為1-5×106/ml。
【4】取100µl的細胞懸液到5ml流式管中,加入5µl Annexin V-FITC混勻,室溫避光孵育5min。
【5】再加入10µl碘化丙啶溶液,并加400µl結合緩沖液(1×),混勻,盡快(<1h)用流式細胞儀或熒光顯微鏡完成檢測。
【相關試劑】
FITC Phalloidin FITC標記鬼筆環(huán)肽
TRITC Phalloidin TRITC標記鬼筆環(huán)肽
Annexin V-EGFP/PI Apoptosis Detection Kit
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