【參數(shù)信息】
英文名稱:pCAMBIA1300-35S-EGFP Plant Expression Vector
原核抗性: 卡那霉su(Kanamycin, Kan)
3'測序引物: pEGFP-N-3: CGTCGCCGTCCAGCTCGACCAG
【簡單概述】
pCAMBIA1300-35S-EGFP Plant Expression Vector是一種雙元植物表達(dá)載體,可用于植物細(xì)胞的表達(dá)外源基因。
其核心結(jié)構(gòu)基于 pCAMBIA1300骨架,并整合了 CaMV 35S啟動子和增強型綠色熒光蛋白報告基因。
載體通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化將目標(biāo)基因?qū)胫参锘蚪M,適用于基因功能研究、蛋白質(zhì)定位及轉(zhuǎn)基因植物篩選。
左邊界(LB)和右邊界(RB)重復(fù)序列界定T-DNA區(qū)域,確保外源基因(如EGFP)穩(wěn)定整合至植物基因組。
pVS1 oriV 和 pVS1 RepA:維持載體在農(nóng)桿菌中的低拷貝穩(wěn)定復(fù)制。
高拷貝ori:支持在大腸桿菌中擴增,便于DNA制備。
細(xì)菌篩選:卡那霉su抗性基因,工作濃度50 μg/mL。
植物篩選:潮霉素B抗性基因,由雙增強型35S啟動子驅(qū)動,適用于轉(zhuǎn)基因植株篩選。
位于lacZα片段內(nèi),含多種限制性酶切位點,便于外源基因插入,支持藍(lán)白斑篩選。
EGFP:增強型綠色熒光蛋白,激發(fā)波長488 nm,用于實時監(jiān)測基因表達(dá)和蛋白質(zhì)亞細(xì)胞定位。
【應(yīng)用領(lǐng)域和優(yōu)勢】
蛋白亞細(xì)胞定位:EGFP 融合標(biāo)簽標(biāo)記目標(biāo)蛋白,實時追蹤其在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、細(xì)胞膜等位置的分布。
轉(zhuǎn)基因效率評估:EGFP 熒光強度直接反映外源基因表達(dá)水平,流式細(xì)胞術(shù)可定量篩選高表達(dá)株系。
啟動子功能分析:替換 35S 啟動子可研究組織特異性表達(dá)。
高效表達(dá):35S 增強型啟動子確保外源基因高水平表達(dá)。
可視化篩選:EGFP 免染色活體檢測,簡化陽性轉(zhuǎn)化體鑒定。
【相關(guān)試劑】
BAPTA,Tetrapotassium Salt
Alexa Fluor 647-Streptavidin
Alexa Fluor 680-Streptavidin
pCAMBIA1300 Plant Expression Vector
2-Heptyl-3-hydroxyl-4-quinolone (PQS)
2-nonyl-3-hydroxy-4-quinolone (C9-PQS)
N-dodecanoyl-L-Homoserine lactone (dDHL)