試劑名稱(chēng):DiSC3(5),多功能熒光染料DiSC3(5)
儲(chǔ)存:-20℃干燥避光保存至少1年,冰袋運(yùn)輸。
多功能熒光染料DiSC3(5),主要用于檢測(cè)和測(cè)量細(xì)胞膜電位的變化,特別是在膜去極化實(shí)驗(yàn)中。
它通過(guò)聚集在細(xì)胞膜的磷脂雙分子層中,導(dǎo)致熒光淬滅;當(dāng)膜電位發(fā)生變化時(shí),DiSC3(5)會(huì)釋放并增強(qiáng)熒光,從而實(shí)現(xiàn)對(duì)膜電位變化的實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)。
由兩個(gè)苯并噻唑單元通過(guò)共軛雙鍵連接,兩端含丙基鏈,氮原子帶正電荷,賦予其膜通透性;屬于硫雜二羰花青類(lèi)熒光染料。
二、核心應(yīng)用場(chǎng)景與避坑要點(diǎn)
原理:染料在超極化膜上聚集導(dǎo)致熒光淬滅,去極化時(shí)釋放至溶液中熒光增強(qiáng),強(qiáng)度與電位變化正相關(guān)。
濃度控制:工作液需維持1% DMSO濃度,避免染料沉淀。
干擾因素:陽(yáng)離子化合物可能競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合膜,導(dǎo)致假陰性;需設(shè)短gan菌肽陽(yáng)性對(duì)照。
實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè):熒光信號(hào)延遲約30秒,需同步記錄時(shí)間軸。
原理:活細(xì)菌完整膜積聚染料發(fā)熒光,死細(xì)胞膜破裂熒光減弱。
菌株選擇:推薦用外膜缺陷型大腸桿菌(如DC2),增強(qiáng)染料滲透性。
抗生素干擾:β-內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素可能引起溶菌性熒光驟降,誤判為死細(xì)胞;建議聯(lián)用SYTOX Green雙驗(yàn)證。
關(guān)鍵問(wèn)題:細(xì)胞凋亡早期線(xiàn)粒體去極化熒光增強(qiáng),但晚期膜破裂熒光消散,需區(qū)分階段。
聯(lián)用JC-1染料(聚合/單體熒光比色法),提高準(zhǔn)確性。
避免CCCP(解耦聯(lián)劑)濃度過(guò)高,導(dǎo)致非特異性膜損傷。
信號(hào)淬滅:激光照射易致光漂白,需添加抗淬滅劑(如DABCO)。
多色兼容性:避免與遠(yuǎn)紅光通道(>650 nm)染料(如Cy5)共用,防止串?dāng)_。
用于科研相關(guān)領(lǐng)域,不能用于人體實(shí)驗(yàn)!
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