操作:吸棄培養(yǎng)液,用預(yù)熱的1×PBS清洗2次后,加入4%多聚甲醛(溶于PBS)室溫固定10分鐘。
注意:避免使用含甲醇的固定劑,否則會破壞肌動蛋白結(jié)構(gòu)。
操作:用0.5% Triton X-100或丙酮處理細胞5分鐘,增強探針滲透性。
注意:透化時間過長可能導(dǎo)致細胞結(jié)構(gòu)損傷,需根據(jù)細胞類型優(yōu)化。
儲存液制備:將凍干粉室溫回溫20分鐘后,加入甲醇或DMSO溶解至20-100 μM,分裝后-20℃避光保存。
工作液制備:用1×PBS稀釋儲存液至80-200 nM(推薦100 nM起始濃度),含1% BSA可降低非特異性結(jié)合。
操作:每孔(96孔板)加入200 μL工作液,室溫避光孵育30-60分鐘(4℃至37℃均可)。
洗滌:用PBS清洗3次,每次30秒,去除未結(jié)合探針。
核染色(可選):用DAPI染色30秒,再用PBS清洗。
封片:滴加抗淬滅封片劑,蓋玻片封片后避光保存(可4℃保存24小時)。
試劑名稱:5-TAMRA Phalloidin,5-TAMRA鬼筆環(huán)肽
中文名稱:5-羧基四甲基羅丹明 鬼筆環(huán)肽
5-TAMRA鬼筆環(huán)肽是一種熒光標記的鬼筆環(huán)肽探針,由鬼筆環(huán)肽與 5-羧基四甲基羅丹明通過化學(xué)偶聯(lián)形成。
它應(yīng)用于細胞骨架研究,是對纖維狀肌動蛋白的特異性標記和動態(tài)分析。
鬼筆環(huán)肽:一種天然雙環(huán)七肽毒素,來源于毒蘑菇鬼筆鵝膏,分子量約 789 Da,通過氫鍵和疏水作用特異性結(jié)合F-actin亞基界面,不與單體肌動蛋白(G-actin)結(jié)合。
5-TAMRA:橙紅色熒光染料,激發(fā)波長(Ex)為 555-565 nm,發(fā)射波長(Em)為 575-580 nm,量子產(chǎn)率高且光穩(wěn)定性強,適合多色成像。
Alexa Fluor 405-Streptavidin
Alexa Fluor 647-Streptavidin
Alexa Fluor 680-Streptavidin
SYBR14NucleicAcidStain(5mM)
Lucifer Yellow CH dilithium salt
PropidiumMonoazide(PMA)疊氮溴化丙錠
Human Dil-Very Low DensityLipoprotein
Acti-stain555phalloidin橙紅色熒光標記鬼筆環(huán)肽
Biotinylated Lycopersicon Esculentum (Tomato) Lectin (LEL, TL)
注意:本試劑用于科研領(lǐng)域,其他用途概不適用!
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