試劑名稱:iFluor 488 Phalloidin,iFluor 488 鬼筆環(huán)肽
iFluor 488 鬼筆環(huán)肽是一種熒光標記的鬼筆環(huán)肽,后者是從毒蕈類鬼筆鵝膏中提取的環(huán)狀七肽毒素。
其分子量<2000 Da,尺寸約12-15 ?,確保對肌動蛋白生理特性干擾小。
特異性結合:高親和力選擇性結合絲狀肌動蛋白 ,不與單體肌動蛋白結合。
穩(wěn)定F-actin:抑制肌動蛋白纖維解聚,降低聚合臨界濃度,并阻斷F-actin的ATP水解活性。
結合計量比:與肌動蛋白亞基按1:1比例結合,非特異性信號可忽略。
激發(fā)/發(fā)射波長:493/517 nm(綠色熒光)。
優(yōu)勢:高亮度、強光穩(wěn)定性、高對比度,適用于定性與定量檢測。
兼容性:與熒光蛋白(如GFP)、量子點、其他iFluor™偶聯(lián)物及抗體染色兼容,支持多色成像。
無物種限制,適用于動物、植物細胞及無細胞體系。
二、應用領域與實驗步驟
固定/未固定細胞(貼壁或懸?。?、組織切片(甲醛固定或石蠟包埋)、體外無細胞系統(tǒng)。
固定:4%甲醇游離甲醛(避免甲醇破壞肌動蛋白),室溫10-30分鐘。
透化:0.1% Triton X-100處理3-5分鐘。
工作液配制:1 μL原液(1000×) + 1 mL PBS(含1% BSA),避光現(xiàn)配。
孵育:覆蓋樣本,避光室溫20-90分鐘(時間依細胞類型優(yōu)化)。
封片:抗淬滅封片劑(如Fluoromount-G™),4℃避光保存可達6個月。
檢測設備
熒光顯微鏡/共聚焦顯微鏡,濾光片:iFluor 488(Ex/Em=493/517 nm)及DAPI(364/454 nm)。
多色成像:可與抗體共染色(添加于一抗/二抗孵育步驟)。
活細胞研究:低濃度下招募胞質肌動蛋白形成穩(wěn)定聚合體,不干擾應力纖維。
Alexa Fluor 647-Streptavidin
Alexa Fluor 680-Streptavidin
Alexa Fluor 555-Streptavidin
Alexa Fluor 594-Streptavidin
BMPO(Spin trapping reagent)
Firefly Luciferase,Recombinant
Ethidium Homodimer 1 (EthD-1)
TOTO 3 Far-red Fluorescent Dye
TOTO 1 Green Fluorescent Dye
TOTO 3 Far-red Fluorescent Dye
TO-PRO-1 Green Fluorescent Dye
Hydroxystilbamidine(FluoroGold)羥芪巴脒(熒光金)
EGTA AM,CalciumChelator鈣螯合劑,CAS號:99590-86-0
Ethidium Homodimer 1 (EthD-1),溴乙啡錠二聚體1,CAS號:61926-22-5