&使用方法
用DMSO溶解粉末,配成5 mg/ml儲(chǔ)存液(如5 mg粉末+1 ml DMSO),分裝避光保存于-20°C。
根據(jù)實(shí)驗(yàn)調(diào)整,常用終濃度為5–20 μg/ml 。
取1 ml細(xì)菌懸液(密度5×10? cells/ml)置于離心管。
加入20 μl儲(chǔ)存液(終濃度≈100 μg/ml),混勻。
冰DPBS清洗2次(4°C, 3,000 rpm, 10 min)。
流式細(xì)胞儀:FL2通道(Ex/Em=488/575 nm)。
熒光顯微鏡:使用518 nm激發(fā)光,收集600 nm發(fā)射信號(hào)。
防護(hù)措施:穿戴實(shí)驗(yàn)服及手套,避免直接接觸(潛在遺傳毒性類比溴化乙錠)。
對(duì)照設(shè)置:需設(shè)空白對(duì)照(未染色樣品)及單染對(duì)照。

英文名稱:Ethidium Iodide碘化乙啶(HI)
Ex/Em:~518/600nm(與DNA結(jié)合)
&Ethidium Iodide碘化乙啶(HI)作用機(jī)制
碘化乙啶通過嵌入DNA雙螺旋堿基對(duì)發(fā)揮作用:
其平面菲啶鎓環(huán)插入DNA堿基對(duì)之間,與核酸形成非共價(jià)結(jié)合。
結(jié)合后染料構(gòu)象固定,熒光強(qiáng)度增強(qiáng)(游離狀態(tài)熒光極弱)。
具中等親脂性,可自由穿透哺乳動(dòng)物細(xì)胞膜及革蘭氏陽性菌細(xì)胞壁。
在含革蘭氏陰性菌(如大腸桿菌)的環(huán)境中,優(yōu)先染色革蘭氏陽性菌。
可能機(jī)制:革蘭氏陰性菌外膜脂多糖(LPS)阻礙染料進(jìn)入,而革蘭氏陽性菌肽聚糖層允許通透。
染色真核細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核,可能涉及線粒體及核仁。
局限性:因可能污染其他亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)(如內(nèi)質(zhì)網(wǎng)),不建議作為特異性核染色劑。
&相關(guān)試劑
Alexa Fluor 647-Streptavidin
Alexa Fluor 680-Streptavidin
TOTO 1 Green Fluorescent Dye
TOTO 3 Far-red Fluorescent Dye
TO-PRO-1 Green Fluorescent Dye
PE-Streptavidin,PE-Cy7標(biāo)記鏈霉親和素
APC-Streptavidin,APC標(biāo)記鏈霉親和素
149733-79-9,Lucifer Yellow Cadaverine
Indo-1 Pentapotassium Salt, Cell lmpermeant
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本試劑用于科研領(lǐng)域,其他用途概不適用!