&使用方法
儲備液:DMSO溶解(典型濃度1–10 mM),分裝避光保存。
工作濃度:0.5–25 μM(依細胞類型和實驗時長調整)。
孵育時間:通常15–45分鐘(避免過長致假陽性)。
洗滌步驟:PBS清洗去除未進入探針,減少背景信號。
死細胞排除:可聯用PI(碘化丙啶)等死細胞染料

英文名稱:5(6)-Carboxy-2'',7''-dichlorofluorescein Diacetate
中文名稱:5[6]-羧基-2',7'-二氯熒光素二乙酸酯
&作用機制
5-(6)-CDCFDA熒光探針的作用依賴于細胞代謝活性和膜完整性,具體機制分三步:
穿透細胞膜:探針以非極性形式自由擴散進入活細胞(死細胞因膜破損無法積累)。
酶促活化:胞內非特異性酯酶水解乙?;?,生成帶負電荷的熒光產物 5-(6)-carboxy-2',7'-dichlorofluorescein(羧基二氯熒光素)。
關鍵點:水解過程依賴酯酶活性,直接反映細胞代謝狀態(tài)。
水解產物因羧基帶負電,無法穿透完整細胞膜,僅在活細胞內積累(死細胞熒光泄漏)。
熒光強度與活細胞數量/活力正相關,可通過流式細胞術或熒光顯微鏡定量。
活性氧(ROS)檢測:二氯取代基增強抗氧化性,熒光強度變化可間接反映ROS水平。
pH傳感:pKa ≈ 4.8,在酸性環(huán)境中熒光增強,適用于細胞器pH監(jiān)測。
生物學意義:該探針同步評估細胞活力雙指標——酶活性(代謝功能)和膜完整性(結構完整),優(yōu)于單一參數檢測方法(如臺盼藍)。
&相關試劑
SYTOX Green Nucleic Acid Stain
YOYO 3 Far-red Fluorescent Dye
YOYO 1 Green Fluorescent Dye
Lucifer Yellow CH dipotassium salt
Mag-520 Potassium Salt 鎂離子熒光探針
Rhod-2,AM,Cell Permeant 鈣離子熒光探針
Fluo-4?Pentapotassium?Salt Fluo-4五鉀鹽
BMPO(Spin trapping reagent) 自旋捕獲劑
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