&使用方法
用3–4%甲醛(不含甲醇)固定細(xì)胞10–30分鐘,避免肌動蛋白結(jié)構(gòu)破壞。
0.1% Triton X-100處理3–5分鐘,增強(qiáng)探針滲透性。
母液:30 μL DMSO溶解iFluor 405 Phalloidin粉末(1000×)。
工作液:1 μL母液 + 1 mL PBS(含1% BSA)。
每孔(96孔板)加100 μL工作液,避光孵育20–90分鐘,PBS洗滌后封片觀察。
多色成像:藍(lán)色熒光可與其他熒光染料(如綠色/紅色標(biāo)記抗體)復(fù)用,用于高內(nèi)涵篩選(HCS)。
神經(jīng)科學(xué):標(biāo)記神經(jīng)元軸突中的F-actin,研究突觸可塑性。
定量分析:結(jié)合Operetta CLS等高通量成像系統(tǒng),量化肌動蛋白網(wǎng)絡(luò)動態(tài)。
英文名稱:iFluor 405 Phalloidin
中文名稱:iFluor 405 鬼筆環(huán)肽
&核心結(jié)構(gòu)
iFluor 405 鬼筆環(huán)肽由兩部分構(gòu)成:
鬼筆環(huán)肽(Phalloidin) :一種七肽生物堿毒素,從毒蘑菇 Amanita phalloides 中分離。
其核心結(jié)構(gòu)為環(huán)狀七肽,含苯并噻吩環(huán),通過氫鍵和疏水作用特異性結(jié)合F-actin亞基界面 。
iFluor 405熒光染料:一種深藍(lán)色熒光團(tuán),通過共價鍵偶聯(lián)至鬼筆環(huán)肽,激發(fā)波長(Ex)402nm,發(fā)射波長(Em)425 nm 。
特異性結(jié)合F-actin:鬼筆環(huán)肽以高親和力(Kd≈nM級)結(jié)合F-actin(聚合態(tài)肌動蛋白)的亞基界面,鎖定相鄰亞基,穩(wěn)定微絲結(jié)構(gòu)。不結(jié)合G-actin(單體肌動蛋白)。
降低肌動蛋白亞基解離速率,抑制ATP水解活性,防止微絲解聚 。
結(jié)合后不影響F-actin功能(如肌纖維收縮、沿肌球蛋白移動)。
物種普適性:對動植物細(xì)胞F-actin親和力一致,無種屬差異 。
&相關(guān)試劑
Alexa Fluor 405-Streptavidin
Alexa Fluor 647-Streptavidin
168482-84-6,Calcein Blue AM
SYTOX Green Nucleic Acid Stain
Lucifer Yellow CH dipotassium salt
Mag-520 Potassium Salt 鎂離子熒光探針
Rhod-2,AM,Cell Permeant 鈣離子熒光探針
Mag-520 AM,Cell Permeant 鎂離子熒光探針
Calcein Deep Red AM鈣黃綠素深紅乙酰氧基甲酯
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本試劑用于科研領(lǐng)域,其他用途概不適用!