【參數(shù)信息】
英文名稱:Fluo-3 Pentasodium Salt熒光探針
中文名稱:Fluo-3五鈉鹽
分子式:C36H25Cl2Na5N2O13
分子量:879.44
激發(fā)/發(fā)射波長:506/526 nm
解離常數(shù)(Kd):390nM (Ca2+)
激發(fā)波長:506nm
發(fā)射波長:526nm
溶解性:溶于水
純度:≥95%
儲(chǔ)存條件:-20℃避光干燥
生產(chǎn)廠商:西安強(qiáng)化生物科技
【簡單概述】
Fluo-3 Pentasodium Salt熒光探針是一種應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)研究的熒光鈣離子指示劑,通過特異性結(jié)合鈣離子后增強(qiáng)熒光信號,
實(shí)現(xiàn)對細(xì)胞內(nèi)游離鈣濃度的實(shí)時(shí)動(dòng)態(tài)監(jiān)測。
化學(xué)結(jié)構(gòu)
Fluo-3 Pentasodium Salt 是 Fluo-3 的鈉鹽形式。核心結(jié)構(gòu)為 BAPT與呫噸環(huán)的衍生物,含兩個(gè)氯原子增強(qiáng)熒光穩(wěn)定性。
【應(yīng)用領(lǐng)域】
細(xì)胞生物學(xué):
實(shí)時(shí)監(jiān)測鈣信號通路,如肌肉收縮、神經(jīng)遞質(zhì)釋放、細(xì)胞凋亡。
案例:流式細(xì)胞術(shù)檢測血小板激活時(shí) Ca2+瞬變。
藥理學(xué)與藥物篩選:
高通量篩選鈣通道阻滯劑/激活劑,例如檢測藥物干預(yù)后的鈣內(nèi)流變化。
神經(jīng)科學(xué):
成像分析神經(jīng)元突觸傳遞中的鈣火花(需低親和力變體 Fluo-3FF 避免信號飽和)。
【操作步驟】
(一)探針溶解與儲(chǔ)存
儲(chǔ)備液配制
用高純度水溶解粉末,參考濃度:
1mM溶液:1mg粉末溶于1.1371mL水(分子量911.7計(jì)算)。
10mM溶液:1mg粉末溶于0.1137mL水 。
渦旋或超聲助溶,確保溶液澄清 。
儲(chǔ)存條件
粉末:-20℃避光干燥保存,有效期≥1年 。
溶液:分裝后-80℃保存≤6個(gè)月,-20℃保存≤1個(gè)月,避免反復(fù)凍融 。
(二)細(xì)胞加載方法
Fluo-3五鈉鹽需通過物理方式導(dǎo)入細(xì)胞:
微注射(Microinjection)
將1-5μM Fluo-3溶液直接注入胞質(zhì) 。
膜片電極(Patch Clamp)
通過電極將探針導(dǎo)入單細(xì)胞 。
劃痕標(biāo)記(Scrape Loading)
輕刮細(xì)胞膜形成微孔,使探針滲入 。
關(guān)鍵提示:操作全程避光,防止熒光淬滅 。
(三)鈣信號檢測步驟
細(xì)胞準(zhǔn)備
加載探針后,用緩沖液(如HHBS)洗滌3次,去除殘留探針 。
儀器設(shè)置
激發(fā)波長:488nm(氬離子激光)。
發(fā)射波長:525-530nm(流式FL1通道或顯微鏡綠色通道)。
信號校準(zhǔn)
設(shè)置未加載探針的細(xì)胞作為背景對照,扣除自發(fā)熒光。
【相關(guān)試劑】
Rhod-2,AM,Cell Permeant
Coumarin Boronic Acid
腔腸素H,Coelenterazine H
LysoTracker Blue DND-22
BAPTA, Tetrasodium Salt
BAPTA, Tetrapotassium Salt
EGTA AM, Calcium Chelator
BAPTA AM, Calcium Chelator
TOTO 3 Far-red Fluorescent Dye
TOTO 1 Green Fluorescent Dye
TO-PRO-1 Green Fluorescent Dye
腔腸素400A, Coelenteramine 400a
CoumarinBoronicAcid(CBA)香豆su硼酸
以上資料由西安強(qiáng)化生物科技有限公司xxn整理!
本試劑僅適用于科研實(shí)驗(yàn),敬請知悉。