一、簡(jiǎn)要介紹
Acti-stain555phalloidin，鬼筆環(huán)肽（Phalloidin），又稱(chēng)鬼筆鵝膏素，是從毒蘑菇鬼筆鵝膏（Amanita phalloides）中分離到的一種七氨基酸多肽毒素，以較高的親和力和特異性結(jié)合肌動(dòng)蛋白絲F-actin（聚合形式的肌動(dòng)蛋白）（Kd=20nM）。
鬼筆環(huán)肽將肌動(dòng)蛋白聚合的臨界濃度降至≤1μg/ml，從而用作一種聚合增強(qiáng)劑。
熒光探針標(biāo)記的鬼筆環(huán)肽（Fluorescent-conjugated Phalloidins）能對(duì)組織培養(yǎng)細(xì)胞、組織切片和無(wú)細(xì)胞制備物進(jìn)行肌動(dòng)纖維絲染色。
經(jīng)鬼筆環(huán)肽標(biāo)記的肌動(dòng)纖維絲仍能維持標(biāo)記前的許多功能特征包括能夠與肌球蛋白相互作用。
二、規(guī)格信息
【外觀】：紅色固體
【純度】：>95%
【分子量】：1775
【保存】：凍干粉4℃干燥保存半年；儲(chǔ)存液-20℃避光保存半年；
【重溶方法】：使用前簡(jiǎn)單離心使得產(chǎn)品都降至管底，加入500µl 甲醇充分溶解后配置成14µM儲(chǔ)存液。建議按照10×50µl分裝，-20℃避光保存，穩(wěn)定保存6個(gè)月。
【生產(chǎn)廠商】：西安強(qiáng)化生物科技；聯(lián)系我們：2229108118;0-29-68881181
三、Acti-stain555phalloidin使用說(shuō)明
1. 免疫熒光（Immunofluorescence）
需要材料：
1）Actin-stainTM 555 Phalloidin（PHDH1）；
2）蓋玻片爬片生長(zhǎng)達(dá)到半?yún)R合的Swiss 3T3細(xì)胞；
3）PBS buffer；
4）固定劑；
5）破膜劑；
6）抗熒光淬滅封片劑；
7）100nM DAPI in PBS；
8）載玻片；
9）蓋玻片封固液（透明指甲油）；
2. 制備穩(wěn)定的熒光標(biāo)記肌動(dòng)蛋白絲（Preparation of stabilized fluorescent actin filaments）
體外肌動(dòng)蛋白運(yùn)動(dòng)試驗(yàn)（in vitro motility assays），穩(wěn)定的熒光標(biāo)記肌動(dòng)蛋白絲是研究肌球馬達(dá)蛋白的底物材料。Actin-stainTM 555 Phalloidin結(jié)合對(duì)肌球蛋白ATPase的肌動(dòng)蛋白激活無(wú)影響。
需要材料：
1）肌動(dòng)蛋白Actin protein；
2）通用肌動(dòng)蛋白緩沖液General Actin buffer；
3）10×聚合緩沖液Polymerization buffer；
4）Actin-stainTM 555 Phalloidin；
操作流程：
1) 用250ul 添加0.2mMATP和1.0mM DTT的通用肌動(dòng)蛋白緩沖液來(lái)重懸兔肌肉肌動(dòng)蛋白（rabbit muscle actin），使其濃度為1mg/ml。
2) 加入1/10體積的聚合緩沖液來(lái)聚合肌動(dòng)蛋白，室溫孵育1h。
3) 用含70nM Actin-stainTM 555 phalloidin的聚合緩沖液按照1:100的比例稀釋聚合的肌動(dòng)蛋白絲。
4) 吸取1ul標(biāo)記好的肌動(dòng)蛋白滴在已滴有一滴抗熒光淬滅劑的載玻片上。
5) 取一干凈蓋玻片蓋在液滴處，用紙巾吸掉多余液體。
6) 熒光顯微鏡觀察熒光纖維。肌動(dòng)蛋白絲平均長(zhǎng)度為2-10um，在4℃避光能穩(wěn)定保存1周。
四、更多試劑
HumanLDL
HumanHDL
HumanOx-LDL
HumanAc-LDL
BODIPY 665/676
BODIPY 558/568 C12
Nigericin,Sodium Salt
Fluo-5N AM,Cell Permeant
Human High Density Lipoprotein
Human Dil-High Density Lipoprotein
CAY10731 (H2S Probe)硫化氫熒光探針
Human Acetylated High Density Lipoprotein
Human VLDL (Human Very Low Density Lipoprotein)
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