血清/血漿microRNA提取試劑盒 

產(chǎn)品信息

產(chǎn)品描述

      目前對RNA干擾和調(diào)節(jié)性小RNA的研究，需要一種能有效提取15-30核苷酸左右大小RNA（包括siRNA和miRNA）的試劑盒。但是傳統(tǒng)的RNA提取方法如硅膠膜不能有效吸附回收，酚/胍抽提和異丙醇或者乙醇沉淀并不能有效沉淀回收微小分子RNA，對于血清血漿樣本更是由于其自身特點更難提取。本試劑盒采用的裂解液迅速直接裂解血清血漿RNA酶，強烈有機抽提去除蛋白和DNA，RNA包括微小分子RNA在高濃度乙醇下吸附于離心柱內(nèi)特殊硅基質(zhì)膜， 再通過一系列特殊漂洗液快速的漂洗－離心的步驟，漂洗液將細胞代謝物，蛋白等雜質(zhì)進一步去除， 最后低鹽的洗脫液將純凈RNA從硅基質(zhì)膜上洗脫。

產(chǎn)品特點

1.離心吸附柱內(nèi)硅基質(zhì)膜全部采用進口世界著名公司特制吸附膜，柱與柱之間吸附量差異極小，可重復性好?？朔藝a(chǎn)試劑盒膜質(zhì)量不穩(wěn)定的弊端。

2.也不需要異丙醇或者乙醇沉淀等容易喪失微小分子RNA的步驟。

3.特殊的裂解液配方，可以處理更多的血清/血漿樣品。

4.多次柱漂洗確保高純度，可用于RNAi，RT-PCR，Northern-blot和各種實驗。

適用范圍

適用于從動物及人體血漿和血清中純化包括miRNA的無細胞總RNA

產(chǎn)品組分

運輸和保存方法

1）本試劑盒在室溫儲存6個月不影響使用效果。

2）所有的溶液應(yīng)該是澄清的，如果環(huán)境溫度低時溶液可能形成沉淀，此時不應(yīng)該直接使用，可在37℃水浴加熱幾分鐘，即可恢復澄清。

3）不合適的儲存于低溫（4℃或者－20℃）會造成溶液沉淀，影響使用效果，因此運輸和儲存均在室溫下（15℃－25℃）進行。

4）Wash Solution 2/3可能加入乙醇使用幾天后出現(xiàn)沉淀晶體，并不影響使用，直接不吸晶體，吸上清使用就可以。

5）避免試劑長時間暴露于空氣中產(chǎn)生揮發(fā)、氧化、PH值變化，各溶液使用后應(yīng)及時蓋緊蓋子。

注意事項

1.第一次使用前請先在Wash Solution 1瓶和Wash Solution 2/3瓶中加入量乙醇，加入后請及時打鉤標記已加入乙醇，以免多次加入。

2.除說明外，所有的離心步驟均在室溫完成，使用轉(zhuǎn)速可以達到13，000 rpm的傳統(tǒng)臺式離心機，如Eppendorf 5415C 或者類似離心機。

3.需要自備乙醇，氯仿。

4.Lysis buffer 和Wash Solution 1含有刺激性化合物，操作時要戴乳膠手套，避免沾染皮膚，眼睛和衣服。若沾染皮膚、眼睛時，要用大量清水或者生理鹽水沖洗。

5.預防RNase 污染，應(yīng)注意以下幾方面：

1)經(jīng)常更換新手套。因為皮膚經(jīng)常帶有細菌，可能導致RNase 污染。

2)使用無RNase 的塑料制品和槍頭避免交叉污染。

3)RNA 在裂解液中時不會被RNase 降解。但提取后繼續(xù)處理過程中應(yīng)使用不含RNase 的塑料和玻璃器皿。玻璃器皿可在150℃烘烤4小時，塑料器皿可在0.5 M NaOH 中浸泡10 分鐘，然后用水清洗，再滅菌，即可去除RNase。

4)配制溶液應(yīng)使用無RNase 的水。（將水加入到干凈的玻璃瓶中，加入DEPC至終濃度0.1%( v/v)，37℃放置過夜，高壓滅菌。）

6.RNA 純度及濃度檢測：

通常情況下通過測量OD260值可以知道RNA產(chǎn)量，測量OD260/OD280 比值可以是衡量蛋白質(zhì)污染程度的指標之一，但是由于血清/血漿的RNA含量特別低，已經(jīng)低于分光光度計測量的下限，無法測量準確，因此一般無法通過測量OD值或者比值的方法來判斷純度或者濃度，只能通過下游做熒光定量RT-PCR來判斷產(chǎn)量。同時無細胞的血清/血漿中的RNA主要是小于100 nt的小RNA，因此傳統(tǒng)的電泳檢測RNA完整性并不適用于血清/血漿RNA

7.本產(chǎn)品僅作科研用途！

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