人層粘連蛋白α3(lama3)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)使用說(shuō)明書(shū)

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　　一、實(shí)驗(yàn)原理?

　　采用雙抗體夾心法酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)(ELISA)。預(yù)包被抗LAMA3抗體的微孔板中依次加入樣本、標(biāo)準(zhǔn)品及HRP標(biāo)記檢測(cè)抗體，形成抗體-抗原-抗體復(fù)合物。TMB顯色后，450nm波長(zhǎng)測(cè)定吸光度，濃度與OD值呈正相關(guān)?。

　　二、試劑盒組成?

　　組分 規(guī)格(96T) 保存條件

　　預(yù)包被抗LAMA3抗體微孔板 12×8條 2-8℃

　　重組LAMA3標(biāo)準(zhǔn)品 10ng/管×2管 -20℃凍存

　　生物素標(biāo)記檢測(cè)抗體 100μL(100×) 避光

　　親和素-HRP復(fù)合物 100μL(100×) 避光

　　TMB顯色液 A/B各10mL 2-8℃避光

　　20×洗滌緩沖液 20mL 室溫

　　注：具體配置以實(shí)際產(chǎn)品批號(hào)說(shuō)明書(shū)為準(zhǔn)?。

　　三、樣本處理?

　　血清/血漿?：室溫靜置2h后離心(1000×g, 15min)，取上清檢測(cè)。

　　組織勻漿?：PBS沖洗后冰上研磨，超聲破碎后5000×g離心5min取上清。

　　細(xì)胞培養(yǎng)上清?：直接離心(1000×g, 10min)去除雜質(zhì)。

　　禁忌：溶血或反復(fù)凍融樣本需棄用?。

　　四、操作流程?

　　平衡?：試劑盒室溫平衡30min。

　　加樣?：標(biāo)準(zhǔn)品/樣本各100μL，空白孔加稀釋液。

　　孵育?：37℃ 90min→洗滌3次(每次30s)。

　　顯色?：避光加入TMB，37℃ 15min→終止液終止。

　　檢測(cè)?：450nm測(cè)定OD值，600nm校正?。

　　五、注意事項(xiàng)?

　　移液精度?：使用校準(zhǔn)移液槍(誤差≤2%)，避免交叉污染?。

　　溫度控制?：試劑需平衡至室溫，禁止水浴加熱?。

　　避光操作?：TMB顯色全程避光，孵育時(shí)覆蓋酶標(biāo)板?。

　　批次一致性?：不同批次試劑不可混用?。

　　注：僅供科研使用，以上資料供參考，如需具體產(chǎn)品說(shuō)明請(qǐng)咨詢(xún)技術(shù)老師或品牌供應(yīng)商。