兔Ⅲ型前膠原氨基端肽(PⅢNT)Elisa試劑盒說明書

　　以下是天正信達對兔Ⅲ型前膠原氨基端肽(PⅢNT)ELISA試劑盒說明書的核心內(nèi)容及操作要點：

　　BS-4220   兔子Ⅲ型前膠原氨基端肽(PⅢNT)ELISA試劑盒  96T/48T

　　一、?實驗原理?

　　采用雙抗體夾心法檢測樣本中PⅢNT濃度。包被抗體與樣本中的PⅢNT結(jié)合后，依次加入標(biāo)記抗體、HRP標(biāo)記親和素及TMB底物顯色，顏色深度與目標(biāo)物濃度成正比。

　　二、?試劑盒組成?

　　預(yù)包被微孔板(96T/48T)

　　PⅢNT標(biāo)準(zhǔn)品(凍干粉，需蒸餾水復(fù)溶)

　　生物素標(biāo)記抗體、HRP標(biāo)記親和素

　　TMB底物A/B液、終止液(2M H?SO?)

　　30×濃縮洗滌液(需稀釋)

　　三、?樣本處理?

　　血清/血漿?：

　　全血室溫凝固10-20分鐘后，2000-3000rpm離心20分鐘，避免溶血。

　　血漿需用EDTA/肝素抗凝，離心后分裝保存于-20℃(避免反復(fù)凍融)。

　　組織勻漿?：PBS勻漿后離心取上清。

　　四、?操作步驟?

　　標(biāo)準(zhǔn)品稀釋?：按說明書梯度稀釋(通常設(shè)5-7個濃度點)。

　　加樣?：

　　標(biāo)準(zhǔn)品孔：50μL/孔

　　樣本孔：10μL樣本+40μL稀釋液(5倍稀釋)。

　　溫育?：37℃孵育30分鐘，洗滌5次(拍干)。

　　顯色?：依次加底物A/B各50μL，37℃避光反應(yīng)15分鐘。

　　終止與檢測?：加終止液后15分鐘內(nèi)測450nm OD值。

　　五、?注意事項?

　　試劑保存?：未開封試劑盒2-8℃保存;復(fù)溶標(biāo)準(zhǔn)品需棄用剩余部分。

　　操作規(guī)范?：

　　使用一次性吸頭避免交叉污染。

　　洗滌時避免金屬器械接觸底物/終止液。

　　質(zhì)量控制?：空白孔OD值應(yīng)<0.2，標(biāo)準(zhǔn)曲線R2≥0.99。

　　六、?結(jié)果計算?

　　以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)、OD值為縱坐標(biāo)繪制曲線，樣本濃度通過曲線方程計算后乘以稀釋倍數(shù)。

　　注：以上資料僅供參考，如需更詳細說明，可參考具體品牌商附帶產(chǎn)品信息。

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