T6P科研檢測(cè)試劑盒的使用說明

　　T6P科研檢測(cè)試劑盒多為植物海藻糖-6-磷酸ELISA試劑盒，僅供科研使用，以下是通用操作說明：

　　一、實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備

　　試劑平衡?：試劑盒從2-8℃冷藏環(huán)境取出，室溫平衡20分鐘，濃縮洗滌液若有結(jié)晶，40℃水浴溶解后再稀釋使用。

　　自備器材?：需準(zhǔn)備酶標(biāo)儀、37℃恒溫箱、移液器、吸水紙、蒸餾水等配套設(shè)備。

　　樣本處理?：植物組織稱取0.1g，加1mL提取液冰浴勻漿離心取上清，短期2-8℃保存不超過48小時(shí)，長(zhǎng)期分裝后-20℃凍存，避免反復(fù)凍融。

　　二、標(biāo)準(zhǔn)操作步驟

　　標(biāo)準(zhǔn)品配制?：凍干標(biāo)準(zhǔn)品加1mL稀釋液復(fù)溶，靜置10分鐘后做系列梯度稀釋。

　　加樣?：標(biāo)準(zhǔn)孔加50μL不同濃度標(biāo)準(zhǔn)品，樣本孔先加40μL樣本稀釋液，再加10μL待測(cè)樣本，空白孔不加樣本和酶標(biāo)試劑。

　　溫育?：封板膜密封后，37℃恒溫箱孵育60-120分鐘，之后棄液拍干，洗板5次，每次浸泡1分鐘。

　　顯色終止?：每孔加入HRP標(biāo)記檢測(cè)抗體100μL，再次溫育洗板后，加TMB底物液100μL，37℃避光孵育15分鐘，加50μL終止液終止反應(yīng)。

　　讀數(shù)?：15分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定各孔OD值。

　　三、結(jié)果計(jì)算

　　以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)、對(duì)應(yīng)OD值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，將樣本OD值代入曲線方程，乘以樣本稀釋倍數(shù)，即可得到樣本中T6P的實(shí)際濃度。

　　四、關(guān)鍵注意事項(xiàng)

　　樣本不可含疊氮鈉(NaN?)，否則會(huì)抑制HRP活性導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失效。

　　建議設(shè)置復(fù)孔，標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)R2需≥0.95，保障結(jié)果可靠性。

　　不同品牌試劑盒組分存在差異，需以對(duì)應(yīng)產(chǎn)品的說明書為準(zhǔn)。

　　注：以上科研產(chǎn)品資料供參考，具體可咨詢技術(shù)老師!

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