科研白介素Elisa試劑盒的實(shí)驗(yàn)步驟

　　白介素ELISA試劑盒采用雙抗體夾心法完成檢測(cè)，核心實(shí)驗(yàn)步驟如下：

　　實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備?

　　將試劑盒從2-8℃環(huán)境取出，室溫平衡15-30分鐘，濃縮洗滌液若有結(jié)晶可37℃水浴助溶，同時(shí)完成樣本預(yù)處理，避免樣本含NaN?抑制HRP酶活性。

　　加樣與孵育?

　　設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔、樣本孔和空白孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔加入梯度稀釋的標(biāo)準(zhǔn)品，樣本孔按要求加入稀釋后的待測(cè)樣本，每孔加樣量控制在50-100μL，整板加樣時(shí)間不超過5分鐘，隨后加入HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體，封板后37℃溫育30-60分鐘。

　　洗板操作?

　　棄去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后甩干，重復(fù)洗板5-6次，最后在吸水紙上拍干孔內(nèi)殘留液體，避免背景升高出現(xiàn)“花板"。

　　顯色與終止?

　　每孔依次加入顯色液A、B，37℃避光孵育15分鐘，待孔內(nèi)液體變?yōu)槊黠@藍(lán)色后，加入終止液，液體將轉(zhuǎn)為黃色。

　　讀數(shù)與結(jié)果計(jì)算?

　　終止反應(yīng)后15分鐘內(nèi)，用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定各孔OD值，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程計(jì)算樣本中白介素的濃度，稀釋過的樣本需乘以對(duì)應(yīng)稀釋倍數(shù)。

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