什么是ELISA，ELISA目的及實驗方法有哪些?

    ELISA即酶聯(lián)免疫吸附測定，指將可溶性的抗原或抗體結(jié)合到聚苯乙x等固相載體上，利用抗原抗體結(jié)合專一性進(jìn)行免疫反應(yīng)的定性和定量檢測方法。

    ELISA應(yīng)用的范圍很廣，而且正在不斷地擴(kuò)大，原則上ELISA可用于檢測一切抗原、抗體及半抗原，可以直接定量測定體液中的可溶性抗原。

    擴(kuò)展資料：

    ELISA操作步驟復(fù)雜，影響反應(yīng)因素較多，特別是固相載體的包被難達(dá)到各個體之間的一致，因此在定量測定中，每批測試均須用一系列不同濃度的參考標(biāo)準(zhǔn)品在相同的條件下制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。

    測定大分子量物質(zhì)的夾心法ELISA，標(biāo)準(zhǔn)曲線的范圍一般較寬，曲線高點(diǎn)的吸光度可接近2.0，繪制時常用半對數(shù)值，以檢測物的濃度為橫坐標(biāo)，以吸光度為縱坐標(biāo)，將各濃度的值逐點(diǎn)連接，所得曲線一般呈S形，其頭、尾部曲線趨于平坦，較呈直線的部分是理想的檢測區(qū)域。

    ELISA也可應(yīng)用于病毒抗體檢測：流感病毒、腮腺炎病毒、麻診、風(fēng)疹、輪狀病毒、皰疹病毒、巨細(xì)胞病毒、EB病毒、腺病毒、腸道病毒、腦炎病毒、黃熱病毒、狂犬病毒和脊髓灰質(zhì)炎病毒等，其敏感性都超過目前常用的檢測方法。此外，還可用于鑒定病毒型別，例如皰疹病毒。

    ELISA目的是檢測血清中特定的抗原，以達(dá)到定性判斷的目的。

    酶聯(lián)免疫吸附測定(簡寫ELISA)指將可溶性的抗原或抗體結(jié)合到聚苯乙x等固相載體上，利用抗原抗體結(jié)合專一性進(jìn)行免疫反應(yīng)的定性和定量檢測方法。

    ELISA分類方法：

    1、夾心法

    夾心法常用于檢測大分子抗原。

    2、間接法

    間接法常用于檢測抗體。

    3、競爭法

    競爭法是一種較少用到的ELISA檢測機(jī)制，一般用于檢測小分子抗原。

    ELISA實驗所有方法的缺點(diǎn)很明顯：

    1、重復(fù)性不好;

    2、收自身抗體、嗜異性抗體等干擾，易出現(xiàn)假陽性;

    3、不論儀器和手工操作，干擾因素較多。影響的是溫度和時間。

    1、直接法(directELISA)

    將抗原直接固定在固相載體上，參加酶符號的一級抗體，即可測定抗原總量，此一級抗體的特異性非常重要。

    優(yōu)勢：操作手續(xù)簡略，因無須運(yùn)用二抗可防止交互反響。

    缺陷：實驗中的一抗都得用酶符號，但不是每種抗體都適合做符號，費(fèi)用相對進(jìn)步。

    2.間接法(indirectELISA)

    此測定辦法與直接法相似，不一樣在于一級抗體沒有酶符號，改用酶符號的二級抗體去辨識一級抗體來測定抗原量。

    優(yōu)勢：二抗能夠加強(qiáng)信號，并且有多種挑選能做不一樣的測定剖析。不加酶符號的一級抗體則能保存它最多的免疫反響性。

    缺陷：交互反響發(fā)作的機(jī)率較高。

    3.雙抗體夾心法(sandwichELISA)

    被檢測的抗原包被在兩個抗體之間，其間一個抗體將抗原固定于固相載體上，即捕捉抗體。另一個則是檢測抗體，此抗體可用酶符號后直接測定抗原的量;或不符號，再透過酶符號的二級抗體來測定抗原的量。這兩種抗體有必要當(dāng)心選擇，才可防止交互反響或競爭一樣的抗原聯(lián)系部位。

    優(yōu)勢：高活絡(luò)、高專一性，抗原無須事前純化。

    缺陷：抗原必定得具有兩個以上的抗體聯(lián)系部位。

    4.競爭法(competitiveELISA)

    樣本里的抗原(自在抗原)和純化并固定在固相載體上的抗原(固定抗原)一同競爭一樣的抗體，當(dāng)樣品里的自在抗原越多，就能夠聯(lián)系越多的抗體，而固定抗原就只能聯(lián)系到較少的抗體，反之亦然。經(jīng)清潔過程，洗去自在抗原和抗體的復(fù)合物，只留下固定抗原和抗體的復(fù)合物，拿來與只要固定抗原的對照組成果相比擬，依據(jù)呈色區(qū)別就可計算出樣品里的抗原含量。

    優(yōu)勢：可適用比擬不純的樣本，并且數(shù)據(jù)再現(xiàn)性很高。

    缺陷：全體的敏感性和專一性都較差。

    注：以上僅供參考，不作為實際數(shù)據(jù)，實驗需嚴(yán)格遵循說明或咨詢技術(shù)老師。

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