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包含有億萬個(gè)隨機(jī)肽段序列的大容量數(shù)據(jù)庫對多種蛋白靶分子是一個(gè)豐富的資源庫，例如包含細(xì)胞因子和生長因子配體、蛋白酶抑制劑和離子門通道。大多數(shù)情況下，肽段的配體通過將固定的純化后的蛋白在噬菌體展示文庫里掃描的方法純化。zui近有報(bào)道表明，甚至更復(fù)雜的靶分子，比如完整的細(xì)胞和組織也能夠通過特異性結(jié)合細(xì)胞表面抗原來鑒定肽段。通過線性和環(huán)形肽段文庫可以鑒定出10—20個(gè)氨基酸的高親和性配體。大多數(shù)這樣的序列和已知一些特定靶蛋白的配體沒有相似性。事實(shí)上這項(xiàng)技術(shù)和其他聯(lián)合方法都是基于相互作用的本質(zhì)的。

我們將描述一種多步鑒定受體的高親和性配體的方法。*步需要建立一個(gè)包含隨機(jī)肽段文庫的絲狀噬菌體pⅧ展示載體。然后文庫再在允許獨(dú)立相對較弱結(jié)合序列的條件下進(jìn)行掃描， 目的是為了篩選出一個(gè)或多個(gè)特異性結(jié)合靶蛋白的配體家族。然后可以通過親和性選擇展示系統(tǒng)，建立包含有很多先導(dǎo)肽段序列的次級文庫。這時(shí)可以采取一系列寡核苷酸突變策略，在改變核苷酸的同時(shí)固定某些特定的核苷酸基團(tuán)，或者在各個(gè)末端加上任意殘基作為受體添加接觸點(diǎn)的探針。然后文庫被運(yùn)用于擴(kuò)充展示高親和肽段克隆的選擇方法，zui后將獲得的克隆通過一種對親和力敏感的酶聯(lián)免疫吸收檢驗(yàn)，即完成這個(gè)過程。

我們已將這項(xiàng)技術(shù)應(yīng)用于尋找細(xì)胞因子和生長因子受體的配體，它還可以在任何可溶性靶分子和固定化靶分子篩選中使用。