公司動(dòng)態(tài)
結(jié)合血清抗體的噬菌體展示肽的選擇
發(fā)布時(shí)間:2010-8-2當(dāng)用血清樣本篩選噬菌體文庫(kù)時(shí),能有高濃度抗體進(jìn)行淘洗。但是,血清中某個(gè)特定DS-Ab拷貝數(shù)可能很少。況且,每輪淘洗所采用的靈敏度域值可會(huì)嚴(yán)重影響對(duì)DS-Ab配體的選擇。同時(shí)還要考慮,進(jìn)行多輪淘洗時(shí),不同配體-抗體對(duì)之間的競(jìng)爭(zhēng)可能會(huì)使所感興趣的配體丟失。
有多種方法可用血清淘洗噬菌體文庫(kù)。為了取得zui高比例的血清抗體,我們利用了磁性微珠所具有的龐大衣殼表面。通過(guò)使用次級(jí)抗體,可將血清抗體定位在微珠表面,就此避免了直接包被過(guò)程中可能發(fā)生的部分變性。對(duì)這個(gè)實(shí)驗(yàn)方案的改變調(diào)整,涉及將血清和文庫(kù)進(jìn)行預(yù)孵育,再用包被有抗人抗體的微珠進(jìn)行捕捉。
選擇策略
用血清淘洗噬菌體文庫(kù),可選擇到一組可結(jié)合血清中數(shù)目眾多的抗體的大規(guī)模多肽文庫(kù)。因而很必要的是,篩選策略要包括一種方法以能夠區(qū)分樣本中識(shí)別DS-Ab的配體和識(shí)別無(wú)關(guān)抗體的配體。與DS-Ab結(jié)合的多肽(DS-多肽)通常只占多肽文庫(kù)中的很小部分。一種能選擇到這一小群的有效方法,就是富集不同陽(yáng)性血清抗體所識(shí)別的配體;因?yàn)樵谶@個(gè)共同亞群之中,DS-肽出現(xiàn)的頻率是相當(dāng)高的。
該陽(yáng)性選擇可通過(guò)兩種可行的策略來(lái)實(shí)現(xiàn):序貫選擇和平行選擇。這兩種策略的基本實(shí)驗(yàn)方案相同,但操作順序則截然相反。
序貫選擇
在序貫選擇中,噬菌體文庫(kù)是用陽(yáng)性血清淘洗的。淘洗所得的噬菌體群再對(duì)不同的陽(yáng)性血清進(jìn)行淘洗,如此反復(fù)。這個(gè)過(guò)程可以用不同的血清按照不同的次序進(jìn)行。為了保持文庫(kù)的復(fù)雜度,限制淘洗輪次(通常不超過(guò)3次)是一個(gè)恰當(dāng)方法。
噬菌體文庫(kù)可以根據(jù)其與陽(yáng)性血清和陰性血清的ELISA反應(yīng)活性來(lái)評(píng)價(jià)。從那些表現(xiàn)出zui感興趣的反應(yīng)特征的噬菌體文庫(kù)中挑選克隆,再逐個(gè)測(cè)試它們與陽(yáng)性血清和陰性血清的反應(yīng)活性。
平行選擇
在這種情況下,同一噬菌體文庫(kù)同時(shí)用各種不同的陽(yáng)性血清和陰性血清進(jìn)行淘洗。這個(gè)操作使得針對(duì)每份血清都可產(chǎn)生一個(gè)結(jié)合此血清中抗體的噬菌體集合。此后,根據(jù)下節(jié)描述的方法,分離那些自陽(yáng)性血清篩選的噬菌體池中存在的特異性配體,從中鑒定出DS-多肽。
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