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[器材和試劑]
● 30m1Corex管，酸洗并硅化
● 預(yù)冷離心機(jī)和吊桶式轉(zhuǎn)頭
● Ficoll（Amersham Biosciences）
● 冰冷磷酸鹽緩沖液（PBS），pH 7．4
● 裂解緩沖液：5mol/L單巰基氰酸胍，10mmol/L乙二胺四乙酸（EDTA），50mmol/L Tris—HCl， 1mmol/L二硫蘇糖醇（DTT），用0．45微孔濾膜過濾
● 4mol/L和3mol/L氯化鋰，高壓滅菌
● RNA溶解緩沖液：0．1%SDS，lmmol/L EDTA，10mmol/LTris—HCl，pH 7．5，高壓滅菌
● 3mol/L乙酸鈉，pH 4．8，焦碳酸二乙酯 （DEPC） 處理 （加0．2ml DEPC/100ml溶液）并滅菌
● DEPC處理過的水 （0．2ml DEPC/100ml水），高壓滅菌
● 用Tris平衡的酚（Sigma）
● 氯仿；異戊醇（24：1）（Sigma）
● 100%乙醇，-20℃

[方法]
1．收集新鮮人血液并立即用Ficoll分離白細(xì)胞。
2．用冰冷PBS洗滌外周血淋巴細(xì)胞3次。
3．在50ml塑料離心管中收集外周血淋巴細(xì)胞，并加入7ml裂解緩沖液（可溶解達(dá)到5×108個(gè)外周血淋巴細(xì)胞），然后劇烈渦旋振蕩以溶解細(xì)胞。
4．加入7體積（49m1）4m01/L氯化鋰，4℃孵育15～20小時(shí)（過夜）。
5．將懸液轉(zhuǎn)移到30mlCorex管內(nèi)，在吊桶式轉(zhuǎn)頭內(nèi)4℃離心2小時(shí)，6500r/min。
6．棄去上清，并用Kimwipe擦拭試管口。用3mol/L氯化鋰（大約15ml）重懸，收集沉淀.將沉淀重懸液離心，6500r/min 1小時(shí)。
7．棄去上清，用2m1RNA溶解液溶解沉淀。在-20℃下，*冷凍懸液。
8．復(fù)溶懸液，每10分鐘渦旋20秒，共45分鐘。
9．用等體積酚抽提1次，并用等體積氯仿抽提1次。
10．加入1/10體積的3mol/L乙酸鈉，pH 4．8和2體積一20℃乙醇。*混合溶液，并在-20℃下孵育過夜。
11．在吊桶式轉(zhuǎn)頭內(nèi)離心RNA，12000r/min 30分鐘。用0．2m1DEPC處理水重懸沉淀。將溶解的DNA轉(zhuǎn)移至1.5m1微量離心管內(nèi)，并加入1/10體積3mol/L乙酸鈉，pH 4．8和2體積一20℃乙醇，重新沉淀。并以乙醇沉淀物形式保存RNA，直至準(zhǔn)備使用時(shí)。