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熒光色素的熒光光譜和量子產(chǎn)率受環(huán)境影響，這也是眾多熒光素具有探針作用的基礎(chǔ)。影響因素主要有：

1）熒光色素染液的pH：熒光色素是否發(fā)射熒光以及輻射何種熒光與它們在溶液中的存在狀態(tài)有關(guān)。熒光色素均含有酸性或堿性助色團(tuán)．溶液的酸堿性對它們的電離有影響，每種熒光色素有它zui適宜的pH。一些熒光色素在pH 8．5～9．5g寸，發(fā)射熒光較強，例如1-萘酚-6-磺酸在pH 6．4～7．4的溶液中會發(fā)射藍(lán)色熒光，當(dāng)pH低于6．4時，則不發(fā)射熒光。

2）溫度：熒光色素的熒光量子產(chǎn)率和熒光強度通常隨溶液溫度的降低而增加，如熒光素的乙醇溶液在0℃度以下每降低10℃熒光量子產(chǎn)率增加3％，降至－80℃時，熒光量子產(chǎn)率接近100％；反之則減弱，甚至導(dǎo)致熒光淬滅。但一般在20℃以下熒光量子產(chǎn)率隨溫度變化不太明顯，故進(jìn)行熒光染色過程中，要注意控制溫度。但有些熒光染色如熒光抗體染色，在37℃時，溫度對異硫氰酸熒光素的熒光效率無明顯影響。

3）溶劑性質(zhì)對熒光素的影響：溶劑性質(zhì)對熒光素的熒光強度有明顯影響，同種熒光素在不同溶劑中，其熒光光譜的位置和強度均有差別。熒光染色時常根據(jù)所需要的pH值緩沖液配制染液。

4）熒光素濃度的影響：熒光素濃度對熒光強度的影響更明顯。在稀溶液中，熒光強度與熒光素的濃度呈線性關(guān)系；濃度增加到一定程度時，熒光強度保持恒定，即使再增加濃度，熒光強度也不發(fā)生變化；若濃度繼續(xù)增加，超過一定限度后，由于熒光物質(zhì)分子間的相互作用引起自身熒光淬滅現(xiàn)象，使熒光強度隨著濃度的增加而減弱。熒光素染色的應(yīng)用濃度一般為10－3～10－5mol/L。

由此可見，在進(jìn)行熒光探針實驗時，應(yīng)注意合適的pH、溫度、溶劑和熒光素濃度等條件。另外，染色液新鮮配制，先配高濃度儲存液，臨用前再稀釋，避免因儲存時間過長而失效。