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實驗二十七 大腸桿菌生長曲線測定
發(fā)布時間：2010-4-2一、基本原理
一定量的微生物，接種在適合的新鮮液體培養(yǎng)基中，在適宜的溫度下培養(yǎng)，以菌數的對數作縱坐標，生長時間作橫坐標，做出的曲線叫生長曲線。一般可分為延遲期、對數期、穩(wěn)定期和衰亡期四個時期。不同的微生物有不同的生長曲線，同一種微生物在不同的培養(yǎng)條件下，其生長曲線也不一樣。因此，測定微生物的生長曲線對于了解和掌握微生物的生長規(guī)律是很有幫助的。
測定微生物生長曲線的方法很多，有血球計數法、平板菌落計數法、稱重法、比濁法等。本實驗采用比濁法測定，由于細菌懸液的濃度與混濁度成正比，因此，可利用光電比色計測定菌懸液的光密度來推知菌液的濃度，并將所測得的光密度值（OD值）與其對應的培養(yǎng)時間作圖，即可繪出該菌在一定條件下的生長曲線?，F(xiàn)已有直接用試管就可以測定OD值的光電比色計（圖Ⅶ-10），只要接種一支試管，定期用它測定，便可做出該菌的生長曲線。
二、器材
培養(yǎng)18—20小時的大腸桿菌培養(yǎng)液，盛有5ml肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基的大試管12支；
72型或72．1型分光光度計，自控水浴振蕩器或搖床，無菌吸管等。
三、操作步驟
1．編號
取11支盛有肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基的大試管，用記號筆標明培養(yǎng)時間，即0、1．5、3、4、6、8、10、12、14、16、20小時。
2．接種
用1ml無菌吸管，每次準確地吸取0．2ml大腸桿菌培養(yǎng)液，分別接種到已編號的11支肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基大試管中，接種后振蕩，使菌體混勻。
3．培養(yǎng)
將接種后的11支試管置于自控水浴振蕩器或搖床上，37℃振蕩培養(yǎng)。分別在0、1．5、3、4、6、8、10、12、14、16、20小時將編號為對應時間的試管取出，立即放冰箱中貯存，zui后一同比濁測定光密度值。
4．比濁測定
以未接種的肉膏蛋白胨培養(yǎng)基作空白對照，選用540—560nm波長進行光電比濁測定。從zui稀濃度的菌懸液開始依次進行測定，對濃度大的菌懸液用未接種的肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基適當稀釋后測定，使其光密度值在0．1—0．65以內，記錄OD值時，注意乘上所稀釋的倍數。
四、實驗報告