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技術(shù)文章

T4 DNA Ligase

發(fā)布時(shí)間:2018-2-6

  T4 DNA Ligase即T4 DNA連接酶,可以催化粘端或平端雙鏈DNA或RNA的5'-P末端和3'-OH末端之間以磷酸二酯鍵結(jié)合,該催化反應(yīng)需ATP作為輔助因子。同時(shí)T4 DNA 連接酶可以修補(bǔ)雙鏈DNA、雙鏈RNA或DNA/RNA雜合物上的單鏈缺刻(single-strand nicks)。
      用途:T4 DNA Ligase常用于DNA片段和載體、linker或adaptor等的連接。也可以用于缺刻修復(fù)及Ligase介導(dǎo)的RNA檢測(cè)。
      來(lái)源:本T4 DNA Ligase由大腸桿菌表達(dá),表達(dá)基因的來(lái)源為T4嗜菌體。
      活性定義:One unit is defined as the amount of enzyme required to give 50% ligation of HindIII fragments of
lambda DNA in 30 min at 16℃ in 20 μl of the assay mixture containing 50 mM Tris, pH 7.5, 10 mM MgCl2, 10 mM DTT, 1 mM ATP, 25 μg/ml BSA and a 5'-DNA termini concent

ation of 0.12 μM (300 μg/ml)。200U等于1個(gè)Weiss unit,以Weiss unit計(jì),本產(chǎn)品共200單位。

 

 純度:不含DNA內(nèi)切酶、外切酶和磷酸酯酶,不含RNA酶,滿足常規(guī)連接反應(yīng)要求。
      酶儲(chǔ)存溶液:20 mM Tris, pH 7.5, 50 mM KCl, 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA and 50% (v/v) glycerol。
      10X Ligation Buffer:400 mM Tris, pH 7.8, 100 mM MgCl2, 100 mM DTT, 5 mM ATP。
      失活或抑制:65℃孵育10分鐘可以導(dǎo)致T4 DNA Ligase失活;NaCl或KCl濃度大于200mM時(shí)強(qiáng)烈抑制T4 DNA Ligase。

 

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