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技術(shù)文章

微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室中如何分離培養(yǎng)基

發(fā)布時(shí)間:2009-10-31

一、革蘭陽(yáng)性桿菌分離培養(yǎng)基
1.羅-琴改良培養(yǎng)基
[用途]
用于結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)。
[配法]
磷酸二氫鉀2.4g,硫酸鎂0.24g,枸櫞酸鎂(或枸櫞酸鈉) 0.6g,天門冬素3.6g,甘油12ml,蒸餾水600ml,馬鈴薯淀粉30g,新鮮雞卵液1L,2%孔雀綠水溶液20ml。
先將磷酸鹽、硫酸鎂、枸櫞酸鎂、天門冬素及甘油,加熱溶解于600ml蒸餾水中。再添放馬鈴薯粉,邊放邊攪,并繼續(xù)置沸水中加熱30min,待冷卻至60℃左右時(shí),加入雞卵液1L及孔雀綠溶液20ml,充分混勻后,用無(wú)菌操作分裝于滅菌試管,每支5~6ml,塞緊橡皮塞(是翻口塞),置于血清凝固器內(nèi)制成斜面,經(jīng)85℃1h間歇滅菌2次(或高壓滅菌115℃20min),待凝固后經(jīng)無(wú)菌試驗(yàn),4℃冷藏備用。
[用法]
取晨咳痰或其它體液標(biāo)本,經(jīng)消化處理和離心沉淀的濃縮液0.1ml(約2滴)滴種于培養(yǎng)基的斜面上,盡量搖晃,置35℃5%~10%二氧化碳溫箱內(nèi)培養(yǎng)1~4周,觀察結(jié)果。凡在1周內(nèi)發(fā)現(xiàn)生長(zhǎng)的菌落,一般不可能是結(jié)核分枝桿菌;在2周后生長(zhǎng)的菌落,奶油狀,略呈黃色,粗糙突起,不透明,即取菌進(jìn)行涂片染色鏡檢及鑒定。
[質(zhì)量控制]
用結(jié)核分枝桿菌菌株作陽(yáng)性培養(yǎng)試驗(yàn)。
[保存]
置4℃冰箱內(nèi)2~4周有效。
注:
⑴ 本培養(yǎng)基由Lowenstein-Jenden設(shè)計(jì)的基礎(chǔ)上改良。
(2)本培養(yǎng)基pH約為6.0左右,一般無(wú)須校正。
(3)間歇滅菌的溫度不宜超過(guò)90℃。
2.血清斜面培養(yǎng)基(呂氏血清斜面)
[用途]
用于白喉棒狀桿菌培養(yǎng)。
[配法]
1%葡萄糖肉湯(pH 7.6)100ml,無(wú)菌動(dòng)物血清(牛、羊、豬、兔) 300ml。
將上述成分混合后,分裝于試管內(nèi),每管約4~5ml。斜插在血清凝固器內(nèi)(或蒸籠)加熱80~85℃30min,使血清凝固成斜面,冷卻后放4℃冰箱內(nèi)。取出后采用間歇滅菌法,85℃滅菌30min,連續(xù)3天,經(jīng)無(wú)菌試驗(yàn)證明無(wú)雜菌生長(zhǎng)即可應(yīng)用。
 

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