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技術(shù)文章

BSA制備技術(shù)介紹

發(fā)布時(shí)間:2016-10-19

牛血清白蛋白(BSA),是血清中的一種球蛋白,包含583個(gè)氨基酸殘基,分子量為 66.446kDa,等電點(diǎn)為4.7。牛血清白蛋白在生化實(shí)驗(yàn)中有廣泛的應(yīng)用,如在免疫分析實(shí)驗(yàn)中作為封閉劑和作為抗體保護(hù)劑。

BSA的制備方法主要有以下幾類:

 

1、冷乙醇方法:

 

1940年由哈附大學(xué)的Cohn的發(fā)明的多步蒸餾法,血清蛋白可以根據(jù)控制不同的溫度和不同的乙醇濃度進(jìn)行分離。他利用溫度和濃度的這種不同來(lái)把血清分離成五種組分,第五部分含有zui多的白蛋白,所以叫做第五組分。冷乙醇法由于加入了有機(jī)溶劑,需要在溫度極低的情況下在血液中加入乙醇直到白蛋白析出,會(huì)有殘留溶劑造成BSA 純度不高?,F(xiàn)代工藝對(duì)Cohn冷乙醇法進(jìn)行了不斷的改進(jìn)。

 

2、熱休克法

 

heat-shock熱激包含控制溫度和過(guò)濾來(lái)分離白蛋白?,F(xiàn)在傾向于在幾個(gè)關(guān)鍵步驟用熱代替有機(jī)溶劑,因?yàn)橐掖加幸讚]發(fā)和危險(xiǎn)性。熱休克法生產(chǎn)的BSA產(chǎn)量高,純度也高,逐漸取代Cohn法成為BSA分餾主要方法,但是熱休克法BSA也有一些缺陷:BSA蛋白高溫變性,活性低。

 

3、色譜層析法(chromatographic)法

 

色譜層析是目前BSA生產(chǎn)*的方法,也是zui為溫和的方法;主要包括三個(gè)步驟,超濾,離子交換色譜層析和硫酸銨沉淀;整個(gè)過(guò)程,無(wú)加熱,無(wú)乙醇,無(wú)辛酸,zui大程度保護(hù)BSA自然結(jié)構(gòu)和功能,純度高,細(xì)胞培養(yǎng)。但與其他方法比成本較高。

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