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1  設(shè)備與材料

1.1 低溫冰箱：-70℃

1.2 高壓滅菌器。

1.3 多孔玻璃珠（或素?zé)芍椋褐睆?~3mm。

1.4 商業(yè)化細(xì)胞凍存管（可選）。

2  操作步驟

2.1 將直徑為2-3mm的瓷珠分裝到小螺旋帽瓶中（每瓶zui多裝30粒）制成冷凍管，高壓滅菌。

2.2 標(biāo)記冷凍管。

2.3 在無菌狀態(tài)下打開冷凍管。

2.4 在所保藏菌種的zui適營養(yǎng)條件下將細(xì)胞培養(yǎng)至穩(wěn)定期或成熟期，進行純度檢查后，將菌株新鮮培養(yǎng)物加入到培養(yǎng)基中制成混懸液，無菌操作將混懸液轉(zhuǎn)入到冷凍管中。

2.5 封好冷凍管并顛倒四至五次乳化菌種培養(yǎng)基混懸液，切勿渦旋振蕩。

2.6 菌種吸附于瓷珠上后，將多余的混懸液吸出。

2.7 也可使用商業(yè)化的細(xì)菌凍存管，此時應(yīng)按照產(chǎn)品說明書進行操作。

3  保藏

   將冷凍管存于-70℃。

4  保藏周期

   可保存10年。

5   恢復(fù)培養(yǎng)

5.1 常用培養(yǎng)基參見附錄G，在無菌條件下打開冷凍管，用無菌真或接種環(huán)取出一粒瓷珠，封好冷凍管并盡快將其送回低溫條件下保存。

5.2 菌種吧哦攢瓷珠可直接接種于固體培養(yǎng)基或適量的液體培養(yǎng)基中。

6  注意事項

   注意事項包括：

   a 為使菌種長期穩(wěn)定保存，在冷凍管使用過程中要注意無菌操作。

   b 在生物安全柜中進行菌種保存和復(fù)蘇等操作。

   c 在處理應(yīng)用過的冷凍管時應(yīng)注意生物安全。