技術文章
免疫學檢測技術
發(fā)布時間:2015-5-8一、概述
抗原與抗體的結合反應是一切免疫測定技術的zui基本原理。在此基礎上結合一些生化或理化方法作為信號顯示或放大系統(tǒng)即可建立免疫測定法,如放射免疫測定法、酶免疫測定法、熒光免疫測定法等。一個成功的免疫測定法必須具備3個要素:性能優(yōu)良的抗體、靈敏和專一性的標記物和的分離手段。按照是否使用標記物分為標記免疫測定法和非標記免疫測定法,后者又稱為經典免疫測定法;按反應介質分為均相或非均相(免疫復合物需分離后檢測)免疫測定法;按反應狀態(tài)分為平衡態(tài)或非平衡態(tài)免疫測定法。按照標記物種類,標記免疫測定法又分為放射性標記測定法和非放射性標記測定法。
目前zui常用的免疫學檢測技術如下:
(1)放射免疫測定技術
(2)酶免疫測定技術
(3)熒光免疫測定技術
(4)發(fā)光免疫測定技術
(5)膠體金免疫測定技術
二、酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)
(一)ELISA的基本原理
ELISA(Enzyme-Linked immunosorbent assay)的基礎是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。這一方法的基本原理如下。
(1)使抗原或抗體結合到某種固相載體表面,井保持其免疫活性;
(2)使抗原或抗體與某種酶連接成酶標抗原或抗體,這種酶標抗原或抗體既保留其免疫活性.又保留酶的活性。
(二)ELISA的類型
ELISA可用于測定抗原,也可用于測定抗體。用于臨床檢驗的ELISA主要有以下幾種類型。
1 雙抗體夾心法測抗原
2 雙抗原夾心法測抗體
3 間接法測抗體
4 競爭法測抗體
5 競爭法測抗原
(三)ELISA的材料與試劑
完整的ELISA試劑盒包含以下各組分:已包被抗原或抗體的固相載體(免疫吸附劑);酶標記的抗原或抗體(結合物);酶的底物;陰性對照品和陽性對照品(定性測定中),參考標準品和控制血清(定量測定中);結合物及標本的稀釋液;洗滌液;酶反應終止液。
1 免疫吸附劑
2 結合物
3 酶的底物
4 洗滌液
5 酶反應終止液
6 陽性對照品和陰性對照品
7 參考標準品
三、磺胺二甲嘧啶的間接競爭ELISA檢測
(一)人工*抗原的合成
(二)合成抗原的鑒定
(三)抗體的制備與純化
(四)標準競爭抑制曲線的制作
(五)畜產品中SM2殘留的ELISA檢測
(六)方法評價
1 特異性
2 靈敏度
3 準確度
4 度
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