技術(shù)文章
免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)
發(fā)布時(shí)間:2015-5-8一、概述
抗原與抗體的結(jié)合反應(yīng)是一切免疫測(cè)定技術(shù)的zui基本原理。在此基礎(chǔ)上結(jié)合一些生化或理化方法作為信號(hào)顯示或放大系統(tǒng)即可建立免疫測(cè)定法,如放射免疫測(cè)定法、酶免疫測(cè)定法、熒光免疫測(cè)定法等。一個(gè)成功的免疫測(cè)定法必須具備3個(gè)要素:性能優(yōu)良的抗體、靈敏和專(zhuān)一性的標(biāo)記物和的分離手段。按照是否使用標(biāo)記物分為標(biāo)記免疫測(cè)定法和非標(biāo)記免疫測(cè)定法,后者又稱(chēng)為經(jīng)典免疫測(cè)定法;按反應(yīng)介質(zhì)分為均相或非均相(免疫復(fù)合物需分離后檢測(cè))免疫測(cè)定法;按反應(yīng)狀態(tài)分為平衡態(tài)或非平衡態(tài)免疫測(cè)定法。按照標(biāo)記物種類(lèi),標(biāo)記免疫測(cè)定法又分為放射性標(biāo)記測(cè)定法和非放射性標(biāo)記測(cè)定法。
目前zui常用的免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)如下:
(1)放射免疫測(cè)定技術(shù)
(2)酶免疫測(cè)定技術(shù)
(3)熒光免疫測(cè)定技術(shù)
(4)發(fā)光免疫測(cè)定技術(shù)
(5)膠體金免疫測(cè)定技術(shù)
二、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)
(一)ELISA的基本原理
ELISA(Enzyme-Linked immunosorbent assay)的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。這一方法的基本原理如下。
(1)使抗原或抗體結(jié)合到某種固相載體表面,井保持其免疫活性;
(2)使抗原或抗體與某種酶連接成酶標(biāo)抗原或抗體,這種酶標(biāo)抗原或抗體既保留其免疫活性.又保留酶的活性。
(二)ELISA的類(lèi)型
ELISA可用于測(cè)定抗原,也可用于測(cè)定抗體。用于臨床檢驗(yàn)的ELISA主要有以下幾種類(lèi)型。
1 雙抗體夾心法測(cè)抗原
2 雙抗原夾心法測(cè)抗體
3 間接法測(cè)抗體
4 競(jìng)爭(zhēng)法測(cè)抗體
5 競(jìng)爭(zhēng)法測(cè)抗原
(三)ELISA的材料與試劑
完整的ELISA試劑盒包含以下各組分:已包被抗原或抗體的固相載體(免疫吸附劑);酶標(biāo)記的抗原或抗體(結(jié)合物);酶的底物;陰性對(duì)照品和陽(yáng)性對(duì)照品(定性測(cè)定中),參考標(biāo)準(zhǔn)品和控制血清(定量測(cè)定中);結(jié)合物及標(biāo)本的稀釋液;洗滌液;酶反應(yīng)終止液。
1 免疫吸附劑
2 結(jié)合物
3 酶的底物
4 洗滌液
5 酶反應(yīng)終止液
6 陽(yáng)性對(duì)照品和陰性對(duì)照品
7 參考標(biāo)準(zhǔn)品
三、磺胺二甲嘧啶的間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA檢測(cè)
(一)人工*抗原的合成
(二)合成抗原的鑒定
(三)抗體的制備與純化
(四)標(biāo)準(zhǔn)競(jìng)爭(zhēng)抑制曲線的制作
(五)畜產(chǎn)品中SM2殘留的ELISA檢測(cè)
(六)方法評(píng)價(jià)
1 特異性
2 靈敏度
3 準(zhǔn)確度
4 度
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