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在加熱滅菌前，培養(yǎng)基(尤其是瓊脂培養(yǎng)基)的成分應(yīng)邊攪拌邊溶解于水中。

正如在2.3中所提到的，高壓滅菌的時(shí)間取決于培養(yǎng)基中微生物的含量，容器的大 小，每個(gè)容器中物質(zhì)的體積和滅菌鍋內(nèi)容器的空間。在制備培養(yǎng)基時(shí)，由于污染的微生物的含量通常很低，所以影響高壓時(shí)間的主要變量取決于上述其他的幾個(gè)因素。滅菌時(shí)間 通常要在121℃下保持15~20min,這個(gè)時(shí)間從中心溫度達(dá)到121℃開始計(jì)算。可以將熱 電偶放人滅菌鍋內(nèi)部中心進(jìn)行測定。lOOmL的瓶子或燒杯單獨(dú)放在髙壓鍋中達(dá)到121℃大約需要10min，如果多個(gè)瓶子緊挨著放滿滅菌鍋內(nèi)的絲懸筐中，瓶子中的物質(zhì)需要 20min才能達(dá)到121℃如果培養(yǎng)基或稀釋液的體積很大時(shí)，則需要更長的時(shí)間；例如單 獨(dú)使用1L的瓶子溫度達(dá)到121℃時(shí)需要20min,如果許多這樣的瓶子緊挨著放滿滅菌鍋 內(nèi)的絲懸筐中，則中心溫度要達(dá)到121℃需要30mm或更長的時(shí)間。很明顯，為了達(dá)到滅 菌的目的，對培養(yǎng)基和稀釋液進(jìn)行高壓滅菌時(shí)，惟一正確的方法是將熱電偶放入滅菌鍋中測定。

當(dāng)培養(yǎng)基分裝在大的容器(1L或更大時(shí)）中時(shí)，可能會因?yàn)檠娱L滅菌加熱時(shí)間而造成 熱降解。因此在高壓滅菌前，先將培養(yǎng)基成分溶解后分裝到較小的容器中（如裝入 100ml帶螺帽的淺試劑瓶中)。