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聚丙烯酰胺凝膠電泳 可用于蛋白和寡核苷酸的分離，zui常用于蛋白質(zhì)的分離，這里總結(jié)了DNA電泳的各種濃度PAGE膠配制的配方及制備方法。

聚丙烯酰胺 凝膠電泳簡稱為PAGE（Polyacrylamide gel electrophoresis），是以聚丙烯酰胺凝膠作為支持介質(zhì)。聚丙烯酰胺凝膠是由單體的丙烯酰胺（CH2=CHCONH2 Acrylamide）和甲叉雙丙烯酰胺（CH2(NHCOHC=CH2) 2 N,N'-methylenebisacrylamide）聚合而成，這一聚合過程需要有自由基催化完成。

各種濃度PAGE膠的配制(DNA電泳用)

50ml體系：

丙烯酰胺	有效分離（bp)	二甲苯青	溴酚藍	丙烯酰胺30%（ml）	10×TBE（ml)	ddH2O（ml）	TEMED（µl）	過硫酸銨10%（µl）
3.5%	100-1000	460	100	5.83	5	39.17	25.0	250
5.0%	100-500	260	65	8.33	5	36.67	25.0	250
8.0%	60-400	160	45	13.33	5	31.67	25.0	250
12.0%	40-200	70	20	20.0	5	25.00	25.0	250
15.0%	25-150	60	15	25.0	5	20.00	25.0	250
20.0%	5-100	45	12	33.33	5	11.67	25.0	250

5ml體系：

丙烯酰胺	丙烯酰胺30% （ml）	10×TBE （ml）	ddH2O （µl）	TEMED （µl）	過硫酸銨10% （µl）
3.5%	0.583	0.5	3.917	2.5	25
5.0%	0.833	0.5	3.667	2.5	25
8.0%	1.333	0.5	3.167	2.5	25
12.0%	2.00	0.5	2.5	2.5	25
15.0%	2.50	0.5	2.0	2.5	25
20.0%	3.333	0.5	1.167	2.5	25

1、丙烯酰胺30%為29：1(質(zhì)量比，丙烯酰胺：雙甲叉丙烯酰胺)

2、TEMED 可以加到1ul/ml。

不同濃度丙烯酰胺和DNA的有效分離范圍表

丙烯酰胺(%)	有效分離范圍(bp)	溴酚蘭*	二甲苯青*
3.5	100～2000	100	460
5.0	80～500	65	260
8.0	60～400	45	160
12.0	40～200	30	70
15.0	25～150	15	60
20.0	10～100	12	45

*表中給出的數(shù)字為與指示劑遷移率相等的雙鏈DNA分子 所含堿基對數(shù)目(bp).

凝膠的制備過程：

1、 按要求裝配好垂直電泳板，兩塊玻璃板的兩側(cè)及底部用1%的瓊脂糖封邊，防止封閉不嚴而使聚丙烯酰胺液漏出。

2、 將裝好的玻璃電泳板傾斜成45～60℃角。

3、 按表3配制所需%濃度凝膠的毫升數(shù)。

4、 加入TEMED后，立即混勻，緩緩倒入兩玻璃板間的膠床中，直到液體接近溢出時為止。

5、 立即插入適當(dāng)?shù)氖嶙?，密切注意防止梳齒下產(chǎn)生氣泡，用一有力的夾將梳子夾在一邊的玻璃板上，然后將玻璃板斜靠在物體上，使成10°角，可減少液體泄漏的機會。

6、 室溫聚合一小時后，將玻璃板插入電泳槽中，上緊，倒入0.1XTBE緩沖液。

7、 小心取出梳子，加樣。

大家可以根據(jù)自己試驗中DNA片段大小的不同選擇配制合適濃度的丙烯酰胺膠。PAGE膠配制過程中記得避免氣泡的產(chǎn)生。