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技術(shù)文章

細(xì)胞計(jì)數(shù)的多種方法

發(fā)布時(shí)間:2014-6-13

血細(xì)胞計(jì)數(shù)器(也被拼寫(xiě)血球計(jì)數(shù)儀)是一種蝕刻玻璃室提出雙方將舉行石英蓋玻片*室地板0.1毫米以上。為9毫米2的總表面積的計(jì)數(shù)室中進(jìn)行蝕刻。

 

圖1、 血細(xì)胞計(jì)數(shù)器的尺寸。

 

濃度的計(jì)算是根據(jù)上下方的蓋玻片的體積。一個(gè)大廣場(chǎng)(參見(jiàn)圖2中的W)擁有量為0.0001毫升(長(zhǎng)x寬x高,也就是說(shuō),0.1厘米×0.1厘米×0.01厘米)。

 

在這兩種方法中,通過(guò)毛細(xì)管作用填充血細(xì)胞計(jì)數(shù)器 - 放置填充的吸移管具有良好的懸吊在血細(xì)胞計(jì)數(shù)器的邊緣的凹口的細(xì)胞混合,然后慢慢地排出一些內(nèi)容,以便通過(guò)毛細(xì)作用進(jìn)入腔室fluidis繪制。

 

染色的細(xì)胞往往有利于可視化和計(jì)數(shù)。無(wú)論是混合細(xì)胞用臺(tái)盼藍(lán)(trypan blue)等體積的[0.4%(重量/體積)tyrypan藍(lán)色在PBS]來(lái)確定活/死計(jì)數(shù)(死細(xì)胞是藍(lán)色的),或殺死??細(xì)胞,用10%福爾馬林,然后染色用臺(tái)盼藍(lán)(trypan blue)或其他染色(以提高所有單元格的可視化。

 

這里有兩個(gè)簡(jiǎn)單的方法,用于計(jì)數(shù)的基礎(chǔ)上用于確定細(xì)胞計(jì)數(shù)的血細(xì)胞計(jì)數(shù)器的表面面積的細(xì)胞。其他的計(jì)數(shù)計(jì)劃accetable的的。方法的選擇取決于細(xì)胞濃度 - 該程序的準(zhǔn)確性取決于計(jì)數(shù)細(xì)胞的數(shù)目。當(dāng)細(xì)胞濃度低,應(yīng)該算更多的網(wǎng)格。

 

方法A 

計(jì)數(shù)的細(xì)胞數(shù)量在4個(gè)外廣場(chǎng)(參見(jiàn)圖2左側(cè)面板)。

 

將細(xì)胞濃度計(jì)算如下:

細(xì)胞濃度每毫升細(xì)胞總數(shù)在4平方×2500×稀釋因子

實(shí)施例:如果一個(gè)計(jì)數(shù)稀釋后的細(xì)胞懸浮液的等分試樣1時(shí)一十450細(xì)胞,原始細(xì)胞濃度= 450×2500×10 = 11,250,000 /毫升

 

方法B的 

估計(jì)細(xì)胞濃度計(jì)數(shù)在大廣場(chǎng)中間5格(參見(jiàn)圖2右側(cè)面板中)。

 

將細(xì)胞濃度計(jì)算如下:

細(xì)胞濃度每毫升細(xì)胞總數(shù)在5平方×50 000×稀釋因子

實(shí)施例:如果一個(gè)數(shù)45細(xì)胞,稀釋后的細(xì)胞懸浮液的等分試樣1點(diǎn)10,原始細(xì)胞濃度= 45×50 000×10 = 22 500 000 /毫升

 

圖2、 計(jì)算方法程序A(左圖)和B(右圖)。

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