技術(shù)文章
內(nèi)干細(xì)胞的研究
發(fā)布時(shí)間:2014-6-5皮膚 可能也含有大量多潛能細(xì)胞。皮膚包含表皮層、層及附屬器等多種結(jié)構(gòu),表面積巨大,細(xì)胞資源豐富。而且,皮膚位置表淺、易于取材。近來研究表明,內(nèi)同樣存在具有多向分化潛能的細(xì)胞。新生鼠細(xì)胞經(jīng)誘導(dǎo)后,不但能向多種中胚層細(xì)胞分化,甚至在特定條件下還能向內(nèi)胚層細(xì)胞如胰島細(xì)胞分化。從成年嚙齒動(dòng)物毛囊的乳頭(dermal papilla,DP)結(jié)構(gòu)中可獲得間充質(zhì)來源的DP細(xì)胞。實(shí)驗(yàn)證實(shí),DP細(xì)胞具有多向分化能力,不但能自發(fā)分化形成肌小管、脂肪細(xì)胞、心肌細(xì)胞及神經(jīng)樣細(xì)胞,而且能在誘導(dǎo)條件下,向成骨細(xì)胞及脂肪細(xì)胞分化。DP的單細(xì)胞克隆也同樣具有成骨及成脂肪雙向分化能力。
不僅嚙齒類動(dòng)物的細(xì)胞內(nèi)存在多分化潛能細(xì)胞,人組織內(nèi)亦發(fā)現(xiàn)多種具有不同分化潛能的細(xì)胞。通過胰酶的消化,可以從人內(nèi)獲得一種非貼壁生長(zhǎng)細(xì)胞--皮膚來源的前體細(xì)胞(skin derived precursors,SKP)。SKP能在神經(jīng)干細(xì)胞相關(guān)的培養(yǎng)液內(nèi)大量擴(kuò)增、長(zhǎng)期傳代培養(yǎng)(可體外培養(yǎng)1年以上);SKP在體外生長(zhǎng)時(shí),表現(xiàn)為懸浮的細(xì)胞微球,表達(dá)神經(jīng)嵴細(xì)胞的標(biāo)記物中間絲蛋白,但較少表達(dá)波形蛋白。SKP能夠向多種神經(jīng)細(xì)胞如神經(jīng)元、神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞分化。不僅如此,SKP還能向部分中胚層細(xì)胞,如脂肪細(xì)胞及平滑肌細(xì)胞分化。雖然SKP在內(nèi)的具體分布及根本作用尚未被*了解,但是它所具有的多胚層(神經(jīng)外胚層及中胚層)分化及自我更新能力,均說明其為來源的成體干細(xì)胞。Bartsch等人以膠原酶消化組織,得到與SKP截然不同的貼壁生長(zhǎng)細(xì)胞,在體外也能長(zhǎng)期培養(yǎng),并具有成骨、成脂肪及成肌肉的三向分化能力,表現(xiàn)出間充質(zhì)干細(xì)胞的特征。
zui近的研究顯示,來源于人的中間絲蛋白陰性細(xì)胞,也能貼壁生長(zhǎng)和長(zhǎng)期傳代培養(yǎng)。這種層細(xì)胞還表達(dá)廣泛存在于間充質(zhì)細(xì)胞和中胚層來源細(xì)胞中的標(biāo)記物,如波形蛋白、CDl05、CD49d、CD29、STRO-1等,不表達(dá)CD34、CDl33等造血干細(xì)胞的標(biāo)記物。以傳統(tǒng)的骨髓基質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)液分別對(duì)其誘導(dǎo)時(shí),可出現(xiàn)脂肪細(xì)胞、成骨細(xì)胞、軟骨細(xì)胞的特征:以成脂肪誘導(dǎo)液誘導(dǎo)3周后,細(xì)胞內(nèi)開始出現(xiàn)大量脂滴;這些脂滴未出現(xiàn)在未經(jīng)誘導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi),說明成脂肪作用并非自發(fā)出現(xiàn)。分子水平的檢測(cè)也顯示脂肪細(xì)胞特異性基因在誘導(dǎo)后2周即已啟動(dòng);以成骨誘導(dǎo)液誘導(dǎo)后l周,就可檢測(cè)到成骨相關(guān)基因ALP及OPN的表達(dá),并可檢測(cè)到堿性磷酸酶的合成;2周后可以檢測(cè)到成骨特異性標(biāo)記物(OCN、OPN、ON)的表達(dá),4周后出現(xiàn)明顯的鈣化結(jié)節(jié)。以成軟骨誘導(dǎo)液誘導(dǎo)后2周即可檢測(cè)到軟骨特異性基因Agrrecan及Ⅱ型膠原的表達(dá),組織化學(xué)及免疫組織化學(xué)染色亦證實(shí)這些軟骨細(xì)胞標(biāo)記物的存在。
不僅如此,對(duì)層細(xì)胞的克隆進(jìn)行研究后發(fā)現(xiàn),大部分克隆細(xì)胞均能在體外長(zhǎng)期傳代培養(yǎng),其染色體均未出現(xiàn)異常。對(duì)單細(xì)胞克隆(共47個(gè))進(jìn)行多向誘導(dǎo)后,發(fā)現(xiàn)其中6.4%的克隆具有成骨-成軟骨-成脂肪的三向分化能力,19.2%的克隆具有雙向分化能力。這些結(jié)果表明,人中存在間充質(zhì)干細(xì)胞。
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