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吸附法分離與純化蛋白質(zhì)
發(fā)布時(shí)間：2014-5-15在蛋白質(zhì)的提純方法中，選擇性吸附也是應(yīng)用歷史較久迄今仍在廣泛采用的方法之一。早期工作常用高嶺土（我國(guó)的一種土質(zhì)，其分子式大致是AL2O3·2SiO2·2H2O）、氧化鋁（AL2O3）及活性炭等吸附劑，由于這些吸附劑吸附力較弱，或者易引起蛋白質(zhì)變性而應(yīng)用不廣，現(xiàn)已為凝膠性吸附劑所代替，如氫氧化鋁凝膠和磷酸鈣凝膠，尤其后者使用zui廣。
吸附劑的應(yīng)用有兩種不同方式。當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)較易吸附時(shí)，可以選擇適當(dāng)條件主要吸附蛋白質(zhì)而分離去雜質(zhì)；當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)較難吸附時(shí)，則選擇利于吸附雜質(zhì)條件將雜質(zhì)與蛋白質(zhì)分開(kāi)。有時(shí)兩種方法可先后使用，以達(dá)到較高的提純目的。吸附條件通常在微酸性條件（pH5～6）及稀鹽溶液中進(jìn)行，鹽濃度過(guò)高會(huì)干擾對(duì)蛋白質(zhì)及酶的吸附，亦即是說(shuō)需要用更多量的吸附劑才能達(dá)到一定結(jié)果。洗脫時(shí)一般在弱堿條件下或適當(dāng)提高洗脫液離子強(qiáng)度，可將吸附的蛋白質(zhì)或酶*洗脫下來(lái)。
吸附操作可以用靜態(tài)吸附，也可以用柱層析吸附，即將凝膠裝成柱進(jìn)行吸附操作。凝膠裝柱后如溶液的通過(guò)能力很差，可用助濾劑（如硅藻土）和凝膠混合，當(dāng)調(diào)整二者的比例時(shí)得到一系列通過(guò)能力和吸附能力不同的層析柱。zui近還使羥基磷灰石[Ca10(PO4)6．（OH）2]分離蛋白質(zhì)和酶，它可以在高鹽濃度下吸附中性及酸性蛋白質(zhì)而排除堿性蛋白質(zhì)。吸附常在pH6.8的磷酸緩沖液中進(jìn)行。洗脫*時(shí)凝膠可反復(fù)使用3～4次，吸附雜質(zhì)較多的凝膠以0.1mol/L*或1mol/L鹽酸洗凈后再用。