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植物組織中可溶性糖含量測定
發(fā)布時間：2014-1-10在作物的碳素營養(yǎng)中，作為營養(yǎng)物質(zhì)主要是指可溶性糖和淀粉。它們在營養(yǎng)中的作用主要有：合成纖維素組成細胞壁；轉(zhuǎn)化并組成其他有機物如核苷酸 、核酸等；分解產(chǎn)物是其他許多有機物合成的原料，如糖在呼吸過程中形成的有機酸，可作為 NH 3 的受體而轉(zhuǎn)化為氨基酸 ；糖類作為呼吸基質(zhì)，為作物的各種合成過程和各種生命活動提供了所需的能量。由于碳水化合物具有這些重要的作用，所以是營養(yǎng)中zui基本的物質(zhì)，也是需要量zui多的一類。
Ⅰ 蒽酮法測定可溶性糖
一、原理
糖在濃硫酸作用下，可經(jīng)脫水反應生成糠醛或羥甲基糠醛，生成的糠醛或羥甲基糠醛可與蒽酮反應生成藍綠色糠醛衍生物，在一定范圍內(nèi)，顏色的深淺與糖的含量成正比，故可用于糖的定量測定。
該法的特點是幾乎可以測定所有的碳水化合物，不但可以測定戊糖與己糖含量，而且可以測所有寡糖類和多糖類，其中包括淀粉、纖維素等（因為反應液中的濃硫酸可以把多糖水解成單糖而發(fā)生反應），所以用蒽酮法測出的碳水化合物含量，實際上是溶液中全部可溶性碳水化合物總量。在沒有必要細致劃分各種碳水化合物的情況下，用蒽酮法可以一次測出總量，省去許多麻煩，因此，有特殊的應用價值。但在測定水溶性碳水化合物時，則應注意切勿將樣品的未溶解殘渣加入反應液中，不然會因為細胞壁中的纖維素、半纖維素等與蒽酮試劑發(fā)生反應而增加了測定誤差。此外，不同的糖類與蒽酮試劑的顯色深度不同，果糖顯色zui深，葡萄糖次之，半乳糖、甘露糖較淺，五碳糖顯色更淺，故測定糖的混合物時，常因不同糖類的比例不同造成誤差，但測定單一糖類時，則可避免此種誤差。
糖類與蒽酮反應生成的有色物質(zhì)在可見光區(qū)的吸收峰為 620 nm ，故在此波長下進行比色。
二、實驗材料、試劑與儀器設備
（一）實驗材料
任何植物鮮樣或干樣。
（二）試劑
1. 80 ％乙醇。
2. 葡萄糖標準溶液（ 100 μg/mL ）：準確稱取 100 mg 分析純無水葡萄糖，溶于蒸餾 水并定容至 100 mL ，使用時再稀釋 10 倍（ 100 μg/mL ）。
3 ．蒽酮試劑：稱取 1.0 g 蒽酮，溶于 80% 濃硫酸（將 98% 濃硫酸稀釋，把濃硫酸緩緩加入到蒸餾 水中） 1000 mL 中，冷卻至室溫，貯于具塞棕色瓶內(nèi)，冰箱保存，可使用 2 ～ 3 周。
（三） 儀器設備
分光光度計 ，分析天平 ，離心管 ，離心機 ，恒溫水浴 ，試管 ，三角瓶，移液管 （ 5 、 1 、 0.5 mL ），剪刀，瓷盤，玻棒，水浴 鍋，電爐，漏斗 ，濾紙 。
三、實驗步驟
1. 樣品中可溶性糖的提取 稱取剪碎混勻的新鮮樣品 0.5 ～ 1.0 g （或干樣粉末 5 ～ 100 mg ），放入大試管 中，加入 15 mL 蒸餾水，在沸水浴中煮沸 20 min ，取出冷卻，過濾入 100 mL 容量瓶 中，用蒸餾水沖洗殘渣數(shù)次，定容至刻度。
2. 標準曲線制作 取 6 支大試管，從 0 ～ 5 分別編號，按表 24-1 加入各試劑。
表 蒽酮法測可溶性糖制作標準曲線的試劑量
試 劑 | 管 號 | |||||
0 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | |
100 μg/mL 葡萄糖溶液（ mL ） | 0 | 0.2 | 0.4 | 0.6 | 0.8 | 1.0 |
蒸餾水（ mL ） | 1.0 | 0.8 | 0.6 | 0.4 | 0.2 | 0 |
蒽酮試劑（ mL ） | 5.0 | 5.0 | 5.0 | 5.0 | 5.0 | 5.0 |
葡萄糖量（ μg ） | 0 | 20 | 40 | 60 | 80 | 100 |
將各管快速搖動混勻后，在沸水浴中煮 10 min ，取出冷卻，在 620 nm 波長下，用空白調(diào)零測定光密度，以光密度為縱坐標，含葡萄糖量（ μg ）為橫坐標繪制標準曲線。
3 ．樣品測定 取待測樣品提取液 1.0 mL 加蒽酮試劑 5 mL ，同以上操作顯色測定光密度。重復 3 次。
四、結果計算
式中： C ——從標準曲線查得葡萄糖量， μg 。
V T ——樣品提取液總體積 , mL 。
V 1 ——顯色時取樣品液量， mL 。
W ——樣品重（ g ）。