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一、改良的鄰甲苯胺硼酸法 (O-TB 法 )

要 求

1．了解血糖微量測定的基本原量。

2．掌握血糖正常水平及其測定的臨床意義。

3．復(fù)習(xí)血糖的來源、去路及其調(diào)節(jié)的有關(guān)理論知識(shí)。

原 理

葡萄糖為一含醛基的己糖，在酸性條件下加熱，可脫水生成5-羥甲基-2-呋喃甲醛，后者與鄰甲苯胺縮合成一綠青色的化合物，其顏色的深淺與樣品中葡萄糖的含量正成比，與進(jìn)行同樣處理的標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖液相比較可求出樣品中葡萄糖的含量。

正常血糖水平為80~120毫克/100ml，在糖尿病及腎上腺皮質(zhì)機(jī)能亢進(jìn)和腦下垂體機(jī)能亢進(jìn)的患者血中葡萄糖含量可顯著升高，饑餓時(shí)，血糖水平可下降。

試 劑

1．O-TB試劑

2．葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液(1.0毫克/毫升)。

器 材

1．硬質(zhì)中試管 三支。

2．刻度吸管 ：0.1毫升三支；5毫升一支。

操 作

取硬質(zhì)中試管 三支，分別標(biāo)以1、2、3號(hào)，按下表操作：混勻后同時(shí)將三支試管置于100℃水浴 中，如熱5~6分鐘后，取出用冷水冷卻，在30分鐘內(nèi)用722型分光光度計(jì) 在620nm比色。以空白管調(diào)零，分別測得A_樣 和A_標(biāo) 。

試劑(毫升)	管 號(hào)
	1(空白管)	2(樣品管)	3(標(biāo)準(zhǔn)管)
蒸 餾 水	0.1
血 漿		0.1
葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液			0.1
O-TB試劑	5.0	5.0	5.0

計(jì) 算

每100毫升血漿中葡萄糖含量(毫克)

= ×０.１×1000= ×100

附注：如血中葡萄糖糖量過高，顏色太深，可于樣品管中加倍加入O-TB試劑，加熱冷卻后比色，并將zui后的計(jì)算結(jié)果乘2，即得每100毫升血漿中葡萄糖的含量。

試劑配制

1.O-TB試劑

冰醋酸 883.2 毫升

硫脲 1.5克

鄰甲苯胺 76.8 毫升

硫脲在冰醋酸中溶解后加鄰甲苯胺混合，再加飽和硼酸溶液40毫升。

充分混勻后放入褐色內(nèi)貯存?zhèn)溆茫话憧少A存幾個(gè)月。

附：飽和硼酸溶液：稱取硼酸6克溶于100毫升蒸餾 水中，放置一夜過濾即可應(yīng)用。

2.葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)貯存液：每毫升10.0毫克，用0.25%安息香酸溶液配制。

3.葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液：每毫升1.0毫克，用0.25%安息香酸溶液將貯存液稀釋十倍(3%三氯醋酸可代替安息香酸溶液)。

二、葡萄糖氧化酶 法

原 理

在pH7.0條件下，葡萄糖氧化酶 可催化血樣中葡萄糖氧化生成葡萄糖酸及*。后者在過氧化物酶的作用下與苯酚，4—氨基安替毗啉氧化縮合成紅色醌式物質(zhì)，在505nm處有zui大吸收峰，標(biāo)本中葡萄糖含量與吸光度成正比，可求得血樣中葡萄糖含量。用本法測定葡萄糖具有高度特異性，因此其準(zhǔn)確度遠(yuǎn)比O-TB法為高，更能反映了血中葡萄糖的真實(shí)含量，是為科研工作中常用的葡萄糖測定方法。隨著試劑藥盒的推廣普及，此法也已廣泛應(yīng)用于臨床檢測。其反應(yīng)過程如下：

葡萄糖氧化酶

β—D葡萄糖+O₂ +H₂ O D —葡萄糖酸+H₂ O₂

過氧化物酶

H₂ O₂ +4—氨基安替吡啉+苯酚 H₂ O+ 紅色醌式物質(zhì)

操 作

取硬質(zhì)中試管三支，分別標(biāo)以1.2.3號(hào)，按下表操作：

	測定管	標(biāo)準(zhǔn)管	空白管
血清 (或血漿)	0.02mL	/	/
葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液100mg/dL	/	0.02mL	/
酶、酚混合試劑	1.5mL	1.5mL	1.5mL

混勻后37℃保溫15分鐘，使用722型分光光度計(jì) 在505nm波長下比色，以空白管調(diào)零，分別測得A_樣 和A_標(biāo) 。

計(jì) 算

葡萄糖含量mg/dl= ×100

100為標(biāo)準(zhǔn)液濃度值mg/dl

試 劑

葡萄糖（氧化酶法）測定試劑盒