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技術(shù)文章

免疫組織化學抗原修復(fù)

發(fā)布時間:2013-12-26

由于石蠟切片標本 多數(shù)使用甲醛固定,甲醛在組織中所形成的醛鍵、羧甲基等封閉了部分抗原 決定簇,或由于蛋白分子之間的交聯(lián)而使抗原決定簇隱蔽。因此在染色前有些抗原需要*行抗原修復(fù)或暴露才能使組織中的抗原抗體充分結(jié)合,出現(xiàn)理想的染色結(jié)果。至于哪種抗原需要進行修復(fù)。需在建立染色程序時確定。常用的方法有加熱抗原修復(fù)法和酶消化法兩種。經(jīng)大量試驗驗證.加熱抗原修復(fù)法優(yōu)于酶消化法,其機制目前仍不清楚,可能是加熱打開了組織抗原因甲醛固定所引起的抗原決定簇的交聯(lián),因此使免疫組織化學染色的敏感度大幅度提高。

 
    (1)加熱修復(fù)法:加熱修復(fù)法分為高壓加熱修復(fù)法和微波修復(fù)法兩種:
    ①高壓加熱修復(fù)法:取一定量枸櫞酸鹽緩沖液(pH=6.0)于高壓鍋中,大火加熱直至沸騰。將脫蠟水化后的組織切片置于不銹鋼或耐高溫塑料切片架上,放人己沸騰的緩沖液中。蓋上鍋蓋,扣緊壓力閥,繼續(xù)加熱至噴汽。從噴汽開始計時.1~2分鐘后,高壓鍋離開熱源,冷卻至室溫(稍冷后,可在自來水籠頭下加速冷卻),取出玻片,先用蒸餾水沖洗2次,再用PBS沖洗2次,每次3分鐘。注意加熱時間長短的控制很重要,從組織切片放人緩沖液到高壓鍋離開火源的總時間控制在5―8分鐘為好.時間過長可能會使染色背景加深。緩沖液的量必須保證能浸泡到所有切片,用過的枸櫞酸緩沖液不能反復(fù)使用。
    ②微波修復(fù)法:取一定量pH 6.0枸櫞酸鹽緩沖液(緩沖液量不得小于500m1),于微波盒中,微波加熱直至沸騰,將脫蠟水化后的組織切片置于耐高溫塑料切片架上。放人己沸騰的緩沖液中,中微波繼續(xù)處理15―20分鐘,取出微波盒冷卻至室溫,從緩沖液中取出玻片。先用蒸餾水沖洗2次,之后用PBS沖洗2次,每次3分鐘。
 
    (2)胰蛋白酶消化修復(fù)法:主要用于細胞內(nèi)抗原的顯示。使用0.1%氯化鈣液(pH7.8)制成0.1%胰蛋白酶液,37℃孵育切片15~30分鐘,之后用PBS洗滌3次,每次3分鐘。
 
    (3)胃蛋白酶消化修復(fù)方法:主要用于細胞間質(zhì)抗原的顯示。一般使用濃度為0.4%,消化時間為37℃,30~180分鐘。

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