技術(shù)文章
紅細(xì)胞滲透脆性(孵育)實(shí)驗(yàn)
發(fā)布時(shí)間:2013-12-20實(shí)驗(yàn)原理
紅細(xì)胞在低滲鹽溶液 中,當(dāng)水滲透其內(nèi)部達(dá)一定程度時(shí),紅細(xì)胞發(fā)生膨脹、破裂。觀察紅細(xì)胞在不同濃度鹽溶液 中的溶血程度,可以判斷其對(duì)低滲鹽溶液的抵抗力,這種抵抗能力與紅細(xì)胞表面積與容積的比值有關(guān),比值小者,紅細(xì)胞抵抗力較小,脆性增加。反之抵抗力增大。
實(shí)驗(yàn)方法
材料:
1.171.1mmol/LNaCl溶液、蒸餾 水
2.移液管 、試管 、水浴 箱等
方法:
1.取12支試管 ,分別按下表加入NaCl溶液和蒸餾 水,得不同濃度的NaCl溶液。
試管號(hào) | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 |
171.1 M NaCl溶液(ml) | 0.30 | 0.35 | 0.40 | 0.45 | 0.50 | 0.55 | 0.60 | 0.65 | 0.70 | 0.75 | 0.80 | 0.85 |
蒸餾水(ml) | 0.95 | 0.90 | 0.85 | 0.80 | 0.75 | 0.70 | 0.65 | 0.60 | 0.55 | 0.50 | 0.45 | 0.40 |
NaClzui終濃度(mmol/L) | 41.0 | 47.9 | 54.7 | 61.6 | 68.4 | 75.2 | 82.1 | 88.9 | 95.8 | 102.6 | 109.4 | 116.3 |
(g/L) | 2.4 | 2.8 | 3.2 | 3.6 | 4.0 | 4.4 | 4.8 | 5.2 | 5.6 | 6.0 | 6.4 | 6.8 |
2.每管中加入1滴全血(或者肝素抗凝血),輕輕搖勻,在室溫靜置2h后觀察結(jié)果。
3.孵育脆性實(shí)驗(yàn),先將肝素抗凝全血37℃孵育24h后,再做1.2步檢測(cè)。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果計(jì)算
先從高濃度開(kāi)始觀察,上層溶液出現(xiàn)透明紅色者為開(kāi)始溶血管,管底紅細(xì)胞*消失者為*溶血管。
參考范圍:
開(kāi)始溶血75.2mmol/L-82.1mmol/L(4.4-4.8g/L)NaCl溶液
*溶血47.5mmol/L-54.7mmol/L(2.8-3.2g/L)NaCl溶液
孵育后
開(kāi)始溶血82.1mmol/L-88.9mmol/L(4.8-5.2g/L)NaCl溶液
*溶血54.7mmol/L-61.6mmol/L(3.2-3.6g/L)NaCl溶液
注意事項(xiàng)
1.CACL必須干燥后準(zhǔn)確稱量,用前新配。
2.每次試驗(yàn)應(yīng)做正常對(duì)照,其結(jié)果應(yīng)在正常范圍內(nèi),被檢者與正常對(duì)照開(kāi)始溶血管NaCl溶液濃度相差0.4g/L有診斷價(jià)值。
3.所有器具要干燥,血標(biāo)本應(yīng)直接滴入液體內(nèi),混勻時(shí)不能用力過(guò)大,以避免體外溶血。
4.在白色背景下觀察結(jié)果,判斷*溶血試管時(shí),可低速離心1min后觀察。
5.重度貧血患者紅細(xì)胞太少,黃疸患者開(kāi)始溶血管不易觀察,均可取肝素抗凝血以生理鹽水洗滌后,再用生理鹽水配成50%的紅細(xì)胞懸液進(jìn)行檢測(cè)。
6.血液標(biāo)本應(yīng)避免用枸櫞酸鹽、草酸鹽和EDTA 鹽抗凝血,以防增加離子強(qiáng)度。如用以上抗凝血標(biāo)本應(yīng)用洗滌紅細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè)。
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