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技術(shù)文章

唾液淀粉酶活性的觀察

發(fā)布時間:2013-12-13

(一)原理

酶是指化學(xué)本質(zhì)為蛋白質(zhì)的生物催化劑。在一定條件下,酶促化學(xué)反應(yīng)進(jìn)行的能力即稱為酶活性(酶活力)。影響酶活性的因素是多方面的,如溫度、PH及某些化學(xué)物質(zhì)等都會影響酶的催化活性。在一定條件下,能使酶活性達(dá)到zui高時的溫度即酶的zui適溫度,而能使酶活性達(dá)到zui高時的PH即酶的zui適PH。例如,唾液淀粉酶的zui適溫度是37℃,而其zui適PH是6.8。能增高酶活性的物質(zhì)稱為酶的激活劑,能降低酶活性卻又不使酶變性的物質(zhì)叫酶的抑制劑。凡能使蛋白質(zhì)變性的因素都可以使酶變性而喪失活性。

酶活性通常是通過測定酶促化學(xué)反應(yīng)的底物或產(chǎn)物量的變化來進(jìn)行觀察的。

本實驗用唾液淀粉酶為材料來觀察酶活性受理化因素影響的情況。唾液中含有唾液淀粉酶。淀粉在該酶的催化作用下會隨著時間的延長而出現(xiàn)不同程度的水解,從而得到各種糊精乃至麥芽糖、少量葡萄糖等水解產(chǎn)物。而碘液能指示淀粉的水解程度——淀粉遇碘可呈紫色、暗褐色與紅色,而麥芽糖與葡萄糖遇碘則不呈顏色反應(yīng),如圖所示:


(二)試劑及器材:

(1)0.5%(W/V)淀粉溶液:稱取0.5g可溶性淀粉,加少量預(yù)冷的蒸餾 水,在研缽 中調(diào)成糊狀,再徐徐倒入約90ml沸水,同時不斷攪拌,zui后加水定容為100ml即成。要求新鮮配制。

(2)稀碘溶液:稱取1.2g I2 、2g KI,加少量蒸餾 水溶解后,再加蒸餾水至200ml。保存于棕色瓶中,用前5倍稀釋。

(3)不同PH溶液:

A液—0.2mol/L Na2 HPO4 溶液:稱取35.62g Na2 HPO4 ·12H2 O,將之溶于蒸餾水后定容至1000ml。

B—0.1mol/L檸檬酸溶液:稱取19.212g無水檸檬酸,將之溶于蒸餾水后定容至1000ml。

①PH5.0緩沖液——取A液10.3ml、B液9.7ml混合而成。

②PH6.8緩沖液——取A液14.55ml、B液5.45ml混合而成。

③PH8.0緩沖液——取A液19.45ml、B液0.55ml混合而成。

(4)0.5%(w/v)蔗糖溶液:稱取蔗糖0.5g,將之溶于蒸餾水后定容至100ml。

(5)斑氏試劑:

A液—稱取無水CuSO4 17.4g,將之溶于100ml預(yù)熱的蒸餾水中,冷卻后用蒸餾水稀釋至150ml。

B液—稱取檸檬酸鈉173g、Na2 CO3 100g,再加蒸餾水600ml,加熱溶解后冷卻,用蒸餾水稀釋至850ml。

將A液與B液混合即得斑氏試劑。

(6)1%(w/v)NaCl溶液:稱取NaCl 1g,將之溶解后用蒸餾水稀釋至100ml。

(7)1%(w/v)CuSO4 溶液:稱取無水CuSO4 1g,將之溶解后用蒸餾水稀釋至100ml。

(8)白瓷板(或比色板)、恒溫水浴 鍋、電爐

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