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脂肪酸的β-氧化—酮體測定法
發(fā)布時(shí)間：2013-9-6（一）原理
酮體包括乙酰乙酸、b —羥丁酸和丙酮三種物質(zhì)。在肝臟中，脂肪酸經(jīng)b —氧化作用生成乙酰CoA。生成的乙酰CoA可經(jīng)代謝縮合成乙酰乙酸，而乙酰乙酸既可脫羧生成丙酮，又可經(jīng)b —羥丁酸脫氫酶 作用被還原生成b —羥丁酸，三種物質(zhì)統(tǒng)稱酮體。酮體為機(jī)體代謝的正常中間產(chǎn)物，在肝臟中生成后須被運(yùn)往肝外組織才能被機(jī)體所利用。在正常情況下，動物體內(nèi)含量甚微；患糖尿或食用高脂肪膳食時(shí)，血中酮體含量增高，尿中也能出現(xiàn)酮體。
本實(shí)驗(yàn)用丁酸做底物，將之與新鮮的肝勻漿一起保溫后，再測定其中酮體的生成量。
因?yàn)樵趬A性溶液中碘可以將丙酮氧化為碘仿（CHI3 ），所以通過用硫代*（Na2 S2 O3 ）滴定反應(yīng)中剩余的碘就可以計(jì)算出所消耗的碘量，進(jìn)而可以求出以丙酮為代表的酮體含量。有關(guān)的反應(yīng)式如下：
根據(jù)滴定樣品與滴定對照所消耗的*溶液體積之差，可以計(jì)算由丁酸氧化生成丙酮的量。
（二）試劑及器材
（1）10%（w/v）*溶液：稱取10g*，在燒杯 中用少量蒸餾 水將之溶解后，定容至100ml。
（2）0.1mol/L正丁酸溶液：稱取13g碘和約40g碘化鉀，放置于研缽 中。加入少量蒸餾 水后，將之研磨至溶解。用蒸餾水定容到1000ml，在棕色瓶中保存。此時(shí)可用標(biāo)準(zhǔn)硫代*溶液標(biāo)定其濃度。
（3）0.5mol/L正丁酸：取0.05ml正丁酸，用0.5mol/L*溶液100ml溶解即成。
（4）0.1mol/L碘酸鉀（KIO3 ）溶液：稱取0.8918g干燥的碘酸鉀，用少量蒸餾水將之溶解，zui后定容至250ml
（5）0.1mol/L硫代*（Na2 S2 O3 ）溶液：稱取25g硫代*，將它溶解于適量煮沸的蒸餾水中，并繼續(xù)煮沸5min。冷卻后，用冷卻的已煮沸過的蒸餾水定容到1000ml。此時(shí)即可用0.1mol/L碘酸鉀溶液標(biāo)定其濃度。
（6）硫代*溶液的標(biāo)定：將蒸餾水25ml、碘化鉀2g、碳酸氫鈉0.5g、10%鹽酸溶液20ml加入一支錐形瓶內(nèi)。另取0.1mol/L碘酸鉀溶液25ml加入其中，然后用硫代*溶液將之滴定至淺黃色。再加入0.1%淀粉溶液2ml，然后繼續(xù)用硫代*溶液將之滴定至藍(lán)色消褪為止。
另設(shè)一空白，其中僅以蒸餾水代替碘酸鉀，其余操作相同。計(jì)算硫代*溶液的濃度所依據(jù)的反應(yīng)式如下：
5KI+KIO3 +6HCI=3I2 +6KCI+3H2 O
I2 +2Na2 S2 O3 =Na2 S4 O6 +2NaI
（7）10%（v/v）鹽酸溶液：取10ml鹽酸，用蒸餾水稀釋到100ml。
（8）0.1%（w/v）淀粉溶液：稱取0.1g可溶性淀粉，置于研缽 中。加入少量預(yù)冷的蒸餾水，將淀粉調(diào)成糊狀。再慢慢倒入煮沸的蒸餾水90ml，攪勻后，再用蒸餾水定容至100ml。
（9）0.9%（w/v）CaCl。
（10）1/15mol/L、PH7.7磷酸緩沖液
（A液）1/15mol/L Na2 HPO4 溶液：稱取Na2 HPO4 ·2H2 O1.187g，將之溶解于100ml蒸餾水中即成。
（B液）1/15mol/L KH2 PO4 溶液：稱取KH2 PO4 0.9078g，將之溶解于100ml蒸餾水將之溶解，zui后定容至100ml。
取A液90 ml、B液10 B液，將兩者混合即可。
（12）勻漿器（或攪拌機(jī)）、碘量瓶。