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一、原理
BCR蛋白分析是一種對(duì)樣品中總蛋白進(jìn)行量化的分析方法，原理是在堿性溶液中蛋白質(zhì)可以將Cu2+還原成Cu1+（雙縮脲反應(yīng)），從而出現(xiàn)明顯的紫色，銅離子被還原主要是蛋白質(zhì)分子中半胱氨酸、胱氨酸、酪氨酸，色氨酸四種氨基酸的作用，然而，與Coomassie燃料結(jié)合反應(yīng)不同的是，一般的多肽鍵都能形成顏色，從而減少了由于蛋白質(zhì)不同的變異性。

與Bradford分析實(shí)驗(yàn)相比較，BCA實(shí)驗(yàn)分析更加客觀，普通的肽鍵就能出現(xiàn)顏色反應(yīng)，其弊端是其反應(yīng)容易被蛋白質(zhì)樣品中的某些化學(xué)物質(zhì)干擾，包括還原劑（二硫蘇糖醇和硫基乙醇等），銅離子螯合劑（EDTA,EGTA）和高濃度緩沖液，但是這些干擾作用可以通過(guò)對(duì)蛋白質(zhì)樣品的稀釋進(jìn)行消除。

二、材料與試劑
1.  牛血清白蛋白（BSA）（Sigma）
2.  BCA蛋白檢測(cè)試劑（Pierce）
三、儀器
1.  分光光度計(jì)（Tecan）
 
四、操作步驟
1.  制備BSA標(biāo)準(zhǔn)樣。先配制1 ml BSA母液（2 mg/ml，溶于水中），再配制濃度在20-2000 ug/ml 的一系列（5~8）稀釋液。
2.  準(zhǔn)備BCA工作液（WR）。計(jì)算所需工作液的總體積。WR是將BCA試劑A和BCA試劑B按50：1的比例混合（混合液是綠色澄清溶液）。
3.  若在測(cè)量管中測(cè)定,每個(gè)樣品需要2.0 ml WR。樣品與WR的比例為1：20。
4.  各吸取0.1 ml 標(biāo)準(zhǔn)樣和未知蛋白樣品，加入標(biāo)記號(hào)的測(cè)量管中。設(shè)兩個(gè)一樣的空白對(duì)照管，一個(gè)用于標(biāo)準(zhǔn)曲線，加入0.1 ml H2O來(lái)代替BSA。另一個(gè)用于蛋白樣品，加入0.1 ml 蛋白提取液。
5.  每管中加入2.0 ml WR，充分混勻。
6.  蓋上蓋子，37℃溫浴30 min。
7.  檢測(cè)前室溫放置10分鐘。
8.  測(cè)量OD562的吸光值。
9.  若在微孔板中測(cè)定，需要WR試劑。樣品與WR的比例為1：8 or 1：20（當(dāng)樣品有*）。
10.  各吸取25或10 ul 標(biāo)準(zhǔn)樣或蛋白樣品，加入微孔中。分別以水或蛋白緩沖液作為標(biāo)準(zhǔn)曲線和蛋白樣品的空白對(duì)照。
11.  沒(méi)孔中加入200 μl WR。
12.  蓋上蓋子，37℃溫浴30 min。
13.  檢測(cè)前室溫放置10分鐘。
14.  使用酶標(biāo)儀測(cè)量OD562的吸光值。