技術(shù)文章
細胞瞬時轉(zhuǎn)染
發(fā)布時間:2013-7-26原理:
通過脂質(zhì)體介導轉(zhuǎn)染法及電穿孔等基因轉(zhuǎn)染技術(shù),將靶基因?qū)爰毎?,一般在轉(zhuǎn)染后48小時左右,靶基因即可在細胞內(nèi)表達。根據(jù)不同的實驗?zāi)康模?8小時后即可進行靶基因表達的檢測等實驗。
應(yīng)用:
觀察目的基因及其表達蛋白在某種細胞中的功能(短時間即可進行觀察,但效應(yīng)會很快丟失)。
一般流程:
1)細胞接種:轉(zhuǎn)染實驗前天接種細胞,各種細胞的平板密度依據(jù)各種細胞的生長率和細胞形狀而定。進行轉(zhuǎn)染當天細胞密度應(yīng)達到60%~80%覆蓋。
2)細胞轉(zhuǎn)染(脂質(zhì)體、電穿孔、FuGENE6等)
3)48小時以后鑒定目的基因的表達情況。
前期準備:
l構(gòu)建好的外源基因載體,或目的基因基本信息。
l待轉(zhuǎn)染的細胞系(1×106個細胞,可傳代,倍增時間小于48小時)以及細胞培養(yǎng)條件的說明。
l若需要檢測靶基因的表達,請?zhí)峁┫鄳?yīng)抗體。
結(jié)果呈現(xiàn):
構(gòu)建好的瞬時轉(zhuǎn)染細胞及相關(guān)的外源基因表達分析。
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