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1． 剪取一小條0.45 μm 的硝酸纖維膜，置于1.5ml eppendorf 管中，浸沒于1 ml，1 mg/ml 的抗原溶液中，5 min。

2． 取出膜，置于濾紙上干燥。

3． 將膜放置于裝有1 ml Buffer A 的eppendorf 管，輕輕震蕩混勻30 min。

4． 移去Buffer A，用新鮮的Buffer A 洗一次，將膜浸沒于0.8-1 ml 相應(yīng)的抗血清中，1-2 h，于混勻器上輕輕震蕩混勻。

5． 移去血清，用PBS 洗膜，4 次，每次5 min。

6． 洗脫抗體

新配置100 mM 甘氨酸（pH 2.5）抗體洗脫液，將膜置于洗液中，手輕搖混勻2 min，迅速將洗液轉(zhuǎn)移至裝有100 μl 1 M Tris（pH 8.0）中和，使抗體復(fù)性。第1 次洗脫用400 μl 抗體洗脫液，第2，3 次用200 μl。

7． 往洗脫下來的液體中加入100 μl Buffer A 以穩(wěn)定抗體，并分裝成30 μl 每管，于-20℃保存。

注：所有步驟均在室溫完成。

Buffer A：5% BSA，10 mM Tris，0.15 M NaCl，0.2% NP-40，pH 7.4。