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單個(gè)細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞因子測定法
發(fā)布時(shí)間：2012-5-12為了確定細(xì)胞因子的產(chǎn)生細(xì)胞，需在單個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)條件下進(jìn)行測定。常用的方法有反向溶血空斑試驗(yàn)（reversehemolytic plaqueassay，RH-PA）和反向ELISA斑點(diǎn)試驗(yàn)。
（1）反向溶血空斑試驗(yàn)（RHPA）：RHPA是一種體外檢測抗體分泌細(xì)胞的試驗(yàn)。其測定細(xì)胞因子分泌細(xì)胞的原理是將待測分泌細(xì)胞因子的細(xì)胞置于經(jīng)SPA包被的單層SRBC中，抗細(xì)胞因子抗體被SPA固定在SRBC表面并與待測細(xì)胞所分泌的細(xì)胞因子結(jié)合：在補(bǔ)體存在時(shí)，細(xì)胞因子和抗體的復(fù)合物激活補(bǔ)體，溶解附近的紅細(xì)胞形成溶血空斑。空斑的大小與細(xì)胞分泌細(xì)胞因子的量成正比。本試驗(yàn)亦可用免疫化學(xué)方法染色溶血空斑中心的細(xì)胞以確定分泌細(xì)胞因子的細(xì)胞的類型：
（2）酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)試驗(yàn)（ELISPOT）：ELISPOT的原理是先將抗細(xì)胞因子抗體包被固相載體，再加入不同來源的細(xì)胞，待細(xì)胞分泌細(xì)胞因子后洗去細(xì)胞，然后加入相應(yīng)的酶標(biāo)抗細(xì)胞因子的抗體，即可通過與底物顯色反應(yīng)的深淺測定結(jié)合在固相載體上的細(xì)胞因子量，并可在光鏡下觀察分泌細(xì)胞因子的細(xì)胞。如用蛋白質(zhì)或肽激活T細(xì)胞，則可測定分泌細(xì)胞因子的抗原特異性T細(xì)胞。在試驗(yàn)體系中，所用的包被抗體與酶標(biāo)抗體應(yīng)分別針對(duì)細(xì)胞因子的不同抗原決定簇。亦可將細(xì)胞因子分泌到可結(jié)合蛋白質(zhì)的膜上，用免疫化學(xué)的方法測定結(jié)合到蛋白質(zhì)膜上的細(xì)胞因子。