技術(shù)文章
IL-18 的檢測
發(fā)布時間:2012-5-511:18又稱干擾素誘導(dǎo)因子,主要由活化的巨噬細胞和庫否細胞及成骨基質(zhì)細胞和腎上腺皮質(zhì)細胞產(chǎn)生。其主要生物學(xué)活性是誘導(dǎo)T細胞產(chǎn)生GM-CSF,促進T細胞增殖和增強NK細胞活性以及誘導(dǎo)THl細胞產(chǎn)生IFN-7。其誘導(dǎo)IFN-y和GM—CSF的能力及誘導(dǎo)CTLL-2細胞生長的能力強于IL-2,并與IL-2有協(xié)同效應(yīng)。IL-18亦可誘導(dǎo)ID2的產(chǎn)生和促進Fas的表達以及抑制IL-10的產(chǎn)生。
(1)C3H/H2J小鼠脾細胞增殖法:用ConA(5ug/mL)和系列稀釋的IL-18樣品共同刺激誘導(dǎo)IFN-y產(chǎn)生。再用ELISA法或病毒抑制試驗檢測細胞培養(yǎng)上清液中的IFN-7含量或活性,以此推測IL-18的活性。
(2)人PBMC增殖法:取3×106/mLPBMC培養(yǎng)在含10%FCS的RPMI-1640培養(yǎng)液中,加入不同濃度的誘導(dǎo)劑(抗CD3抗體0.1ug/mL或10U/mL IL-2或ConA0.5ug/ml)和系列稀釋的人IL-18待檢樣品。置37℃5%C02溫箱中培養(yǎng)24h,用ELISA法或病毒抑制試驗檢測細胞培養(yǎng)上清液中的IFN-7含量或活性,以此推測IL-18的活性。1個單位的IL-18活性為IL-18與0.5ug/mLConA共刺激時,能誘導(dǎo)0.25mLPBMC(7.5X105細胞)產(chǎn)生1601U/mLIFN-y所需的IL-18量。
(3)51Cr釋放試驗:此法可檢測IL-18誘導(dǎo)NK細胞殺傷K562細胞的能力,將人PBMC與系列稀釋的IL-18樣品共孵育24h,然后測定PBMC中的NK細胞活性。
制藥網(wǎng)