技術(shù)文章
IL-18 的檢測
發(fā)布時(shí)間:2012-5-511:18又稱干擾素誘導(dǎo)因子,主要由活化的巨噬細(xì)胞和庫否細(xì)胞及成骨基質(zhì)細(xì)胞和腎上腺皮質(zhì)細(xì)胞產(chǎn)生。其主要生物學(xué)活性是誘導(dǎo)T細(xì)胞產(chǎn)生GM-CSF,促進(jìn)T細(xì)胞增殖和增強(qiáng)NK細(xì)胞活性以及誘導(dǎo)THl細(xì)胞產(chǎn)生IFN-7。其誘導(dǎo)IFN-y和GM—CSF的能力及誘導(dǎo)CTLL-2細(xì)胞生長的能力強(qiáng)于IL-2,并與IL-2有協(xié)同效應(yīng)。IL-18亦可誘導(dǎo)ID2的產(chǎn)生和促進(jìn)Fas的表達(dá)以及抑制IL-10的產(chǎn)生。
(1)C3H/H2J小鼠脾細(xì)胞增殖法:用ConA(5ug/mL)和系列稀釋的IL-18樣品共同刺激誘導(dǎo)IFN-y產(chǎn)生。再用ELISA法或病毒抑制試驗(yàn)檢測細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的IFN-7含量或活性,以此推測IL-18的活性。
(2)人PBMC增殖法:取3×106/mLPBMC培養(yǎng)在含10%FCS的RPMI-1640培養(yǎng)液中,加入不同濃度的誘導(dǎo)劑(抗CD3抗體0.1ug/mL或10U/mL IL-2或ConA0.5ug/ml)和系列稀釋的人IL-18待檢樣品。置37℃5%C02溫箱中培養(yǎng)24h,用ELISA法或病毒抑制試驗(yàn)檢測細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的IFN-7含量或活性,以此推測IL-18的活性。1個(gè)單位的IL-18活性為IL-18與0.5ug/mLConA共刺激時(shí),能誘導(dǎo)0.25mLPBMC(7.5X105細(xì)胞)產(chǎn)生1601U/mLIFN-y所需的IL-18量。
(3)51Cr釋放試驗(yàn):此法可檢測IL-18誘導(dǎo)NK細(xì)胞殺傷K562細(xì)胞的能力,將人PBMC與系列稀釋的IL-18樣品共孵育24h,然后測定PBMC中的NK細(xì)胞活性。
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