制藥網(wǎng)
技術(shù)文章
IL-18的檢測(cè)
發(fā)布時(shí)間：2012-5-511：18又稱干擾素誘導(dǎo)因子，主要由活化的巨噬細(xì)胞和庫否細(xì)胞及成骨基質(zhì)細(xì)胞和腎上腺皮質(zhì)細(xì)胞產(chǎn)生。其主要生物學(xué)活性是誘導(dǎo)T細(xì)胞產(chǎn)生GM-CSF，促進(jìn)T細(xì)胞增殖和增強(qiáng)NK細(xì)胞活性以及誘導(dǎo)THl細(xì)胞產(chǎn)生IFN-7。其誘導(dǎo)IFN-y和GM—CSF的能力及誘導(dǎo)CTLL-2細(xì)胞生長(zhǎng)的能力強(qiáng)于IL-2，并與IL-2有協(xié)同效應(yīng)。IL-18亦可誘導(dǎo)ID2的產(chǎn)生和促進(jìn)Fas的表達(dá)以及抑制IL-10的產(chǎn)生。
（1）C3H／H2J小鼠脾細(xì)胞增殖法：用ConA（5ug／mL）和系列稀釋的IL-18樣品共同刺激誘導(dǎo)IFN-y產(chǎn)生。再用ELISA法或病毒抑制試驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的IFN-7含量或活性，以此推測(cè)IL-18的活性。
（2）人PBMC增殖法：取3×106／mLPBMC培養(yǎng)在含10％FCS的RPMI-1640培養(yǎng)液中，加入不同濃度的誘導(dǎo)劑（抗CD3抗體0．1ug／mL或10U／mL IL-2或ConA0．5ug/ml）和系列稀釋的人IL-18待檢樣品。置37℃5％C02溫箱中培養(yǎng)24h，用ELISA法或病毒抑制試驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的IFN-7含量或活性，以此推測(cè)IL-18的活性。1個(gè)單位的IL-18活性為IL-18與0．5ug／mLConA共刺激時(shí)，能誘導(dǎo)0．25mLPBMC（7．5X105細(xì)胞）產(chǎn)生1601U／mLIFN-y所需的IL-18量。
（3）51Cr釋放試驗(yàn)：此法可檢測(cè)IL-18誘導(dǎo)NK細(xì)胞殺傷K562細(xì)胞的能力，將人PBMC與系列稀釋的IL-18樣品共孵育24h，然后測(cè)定PBMC中的NK細(xì)胞活性。