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外周血白細(xì)胞的分離
發(fā)布時(shí)間：2012-4-71．自然沉降法
人外周血紅細(xì)胞與白細(xì)胞的比例約為6000～1000:1，兩類細(xì)胞的沉降速度不同，據(jù)此加以分離。自然沉降法是利用紅細(xì)胞自然沉降率較快加以分離。該法簡便易行，對(duì)細(xì)胞損傷少，但純度差。
【試劑及配制】
（1） 無Ca2+、Mg2+ Hank’s液
（2） 含10%～20% 滅活小牛血清Hank’s液
【操作方法】
（1） 取靜脈血2ml，放入加有抗凝劑的試管中，輕輕混勻;
（2） 將試管直立靜置于室溫或37℃溫箱中30～60min，待紅細(xì)胞自然沉降。此時(shí)可見試管中的懸液分3層，上層為淡黃色血漿，底層為紅細(xì)胞，在緊貼紅細(xì)胞層上有一呈灰白色的白細(xì)胞層；
（3） 用毛細(xì)管吸取位于紅細(xì)胞層上面的富含白細(xì)胞的細(xì)胞懸液，移入另一試管中；
（4） 加入無Ca2+、Mg2+Hank’s液至離試管口3cm處，混勻，以水平離心機(jī)2000r/min 離心10min，棄上清，同法在洗滌兩次；
（5） 沉淀細(xì)胞用適量10%～20% 滅活小牛血清的Hank’s液重懸，計(jì)數(shù)，配成所需的細(xì)胞濃度的懸液，一般常用2×106/min。
2．加速紅細(xì)胞沉降法
利用高分子量的聚合物促使紅細(xì)胞凝聚成串錢狀，從而加速紅細(xì)胞沉降，使之與白細(xì)胞分離。常用的高分子聚合物有明膠、右旋糖酐、聚乙烯吡咯烷酮（PVP）及甲基纖維素等。
【試劑及配制】
（1） 3%明膠（粘度為25泊以上）：選取明膠，用生理鹽水配成3%溶液，置沸水浴加熱溶解，分裝，高壓蒸汽滅菌8磅15～20min。
（2） 6%右旋糖酐（分子量200～400KD）：用生理鹽水配制。
【操作方法一】
（1） 取抗凝靜脈血加入等量3%明膠鹽水溶液中，混勻；
（2） 將試管直立靜置室溫或37℃溫箱中30～60min，利用明膠與紅細(xì)胞的粘合作用，促使紅細(xì)胞快速下沉，而白細(xì)胞留在明膠溶液中；
（3） 用毛細(xì)吸管吸取富含白細(xì)胞的上層液，移入另一試管中；
（4） 按上述自然沉降法（4）～（5）操作。
【操作方法二】
（1）取抗凝靜脈血加入等量6%右旋糖酐溶液中，混勻；
（2）按*種操作方法的（2）～（4）操作。