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顯微圖像分析應(yīng)用中的注意事項(xiàng)
發(fā)布時間：2012-3-3隨著生命科學(xué)研究的突飛猛進(jìn)和各門學(xué)科定量研究的快速發(fā)展，圖像分析系統(tǒng)在醫(yī)學(xué)研究中的應(yīng)用越來越廣泛．并逐漸成為組織化學(xué)和免疫組織化學(xué)定量分析的主要手段。為了得到比較客觀的圖像分析結(jié)果，應(yīng)該充分考慮諸多因素對圖像分析系統(tǒng)的影響，并盡可能使實(shí)驗(yàn)組與對照組的處理?xiàng)l件保持一致，應(yīng)用注意事項(xiàng)如下：
《一》設(shè)計(jì)在先，測試在后
這是在進(jìn)行圖像分析時zui容易忽視的問題。在實(shí)驗(yàn)之前的設(shè)計(jì)中，要滿足有關(guān)測試所需的基本條件，如圖像的來源是否帶有偏差抽樣，放大倍數(shù)是否相等。這些圖像可能因?yàn)閬碓床环蠄D像分析系統(tǒng)的基本原理和應(yīng)用條件而存在明顯缺陷，勉強(qiáng)測試和分析很可能導(dǎo)致錯誤結(jié)果，得出錯誤結(jié)論。
《三》測試樣本的代表性
應(yīng)用隨機(jī)抽樣的方法來保證測試樣本具有足夠的代表性。使用足夠的樣本數(shù)量，一定要注意到照片數(shù)或視野數(shù)并不能代替實(shí)際研究對象的例數(shù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
《三》實(shí)驗(yàn)操作過程的一致性
用于定量分析的標(biāo)本，從取材和固定開始的各項(xiàng)操作和每一步驟的處理應(yīng)該相同。對照組與實(shí)驗(yàn)組的組織塊大小與厚度應(yīng)一致；切片厚度、固定方法也要一致；如用貼片法，實(shí)驗(yàn)組與對照組的切片裱在同一載玻片上，如用漂染法，則在同一容器中進(jìn)行處理；各種試劑的濃度、處理時間及顯色時間應(yīng)盡可能一致。只有做到實(shí)驗(yàn)操作的嚴(yán)格一致，對照組與實(shí)驗(yàn)組之間的定量分析才有可比性。
《四》圖像分析系統(tǒng)輸入條件的一致性
在對圖像進(jìn)行輸入時，應(yīng)盡可能地保持各種條件一致。如利用光學(xué)顯微鏡、電子顯微鏡、數(shù)碼攝像機(jī)或數(shù)碼照相機(jī)作為輸入設(shè)備時，顯微鏡的光源電壓、光圈大小、聚光器位置、放大倍數(shù)、圖像的清晰度和攝像機(jī)或照相機(jī)的光圈、焦距等均應(yīng)一致。輸入圖像過程中任何細(xì)小變化均可能導(dǎo)致定量結(jié)果的較大差別，特別是灰度值或光密度值等。圖像的顏色飽和度、反差和亮度的強(qiáng)弱也與操作者主觀意志密切相關(guān)，這就要求操作者不能帶有主觀意識操作，否則可人為地造成定量結(jié)果的誤差。
《五》圖像分析系統(tǒng)觀有參數(shù)的局限性
圖像分析系統(tǒng)中的一些常用參數(shù)，如面積、周長、長度及光密度等并非能解決所有實(shí)驗(yàn)的需求，有時應(yīng)根據(jù)組織結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，開發(fā)和引入適合于組織化學(xué)與免疫組織化學(xué)染色的新特征參數(shù)，以便全面準(zhǔn)確地反映組織結(jié)構(gòu)特點(diǎn)。如果多種參數(shù)聯(lián)合應(yīng)用，有助于反映某一細(xì)胞或組織區(qū)別于其他細(xì)胞或組織的特征。
《六》三維定量信息的局限性
圖像分析系統(tǒng)獲得的信息為二維定量信息，不能真實(shí)地反映組織結(jié)構(gòu)的三維定量特征。例如，當(dāng)比較各組樣本的參照空間（包含感興趣結(jié)構(gòu)的區(qū)域）體積不同時，很難根據(jù)圖像分析系統(tǒng)所得到的密度信息得出正確結(jié)論，即存在所謂的參照空間的“陷阱”問題?，F(xiàn)代體視學(xué)方法能夠獲得組織結(jié)構(gòu)的三維定量特征，也能夠獲得感興趣結(jié)構(gòu)的定量信息。因此，把現(xiàn)代體視學(xué)方法的原理正確應(yīng)用于圖像分析系統(tǒng)的定量研究中，有利于獲得更為準(zhǔn)確的定量信息。