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拖尾

　　現(xiàn)象：產(chǎn)物在凝膠上呈Smear狀態(tài)。

　　原因：

　　1.模板不純

　　2.Buffer不合適

　　3.退火溫度偏低

　　4.酶量過多

　　5.dNTP、Mg2+濃度偏高

　　6.循環(huán)次數(shù)過多

　　對策：

　　1.純化模板

　　2.更換Buffer

　　3.適當提高退火溫度

　　4.適量用酶

　　5.適當降低dNTP和鎂離子的濃度

　　6.減少循環(huán)次數(shù)

　　

　　假陽性

　　現(xiàn)象：空白對照出現(xiàn)目的擴增產(chǎn)物

　　原因：

　　靶序列或擴增產(chǎn)物

　　的交*污染

　　對策：

　　1.操作時應小心輕柔，防止將靶序列吸入加樣槍內(nèi)或濺出離心管外；

　　2.除酶及不能耐高溫的物質(zhì)外，所有試劑或器材均應高壓消毒。所用離心管

　　及加樣槍頭等均應一次性使用。

　　3.各種試劑*行分裝，然后低溫貯存