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樹突狀細(xì)胞（DC）為先天性和適應(yīng)性免疫反應(yīng)提供了關(guān)鍵性的。這些特化細(xì)胞具有捕獲、處理、并將抗原呈遞給原態(tài)T細(xì)胞以促進(jìn)其分化和激活的能力。盡管所有的樹突狀細(xì)胞都能夠呈遞抗原，但它們卻是一個(gè)異質(zhì)性的細(xì)胞群。幾種樹突狀細(xì)胞亞群已經(jīng)鑒定出，它們在位置、表型和免疫功能上各不相同。這種可塑性使得它們在呈遞不同微生物抗原或損傷細(xì)胞成分時(shí)有差異地形成免疫反應(yīng)。

人類血液中大約1-10%的外周血單核細(xì)胞（PBMC）為樹突狀細(xì)胞。這種稀缺，以及相對(duì)低豐度的*標(biāo)記物和不斷發(fā)現(xiàn)的新亞群，使得分離樹突狀細(xì)胞進(jìn)行功能研究成為了一個(gè)挑戰(zhàn)。為了解決這一難題，R&D Systems現(xiàn)在開發(fā)了一種負(fù)選試劑盒，能夠富集從人類血液中分離出的樹突狀細(xì)胞。與正選試劑盒不同，MagCellect Human Blood DC Isolation Kit（目錄號(hào) MAGH110）讓分離出的樹突狀細(xì)胞群未被觸碰，減少了細(xì)胞在分選過程中發(fā)生改變的風(fēng)險(xiǎn)。對(duì)用MagCellect Kit分離出的樹突狀細(xì)胞群進(jìn)行流式細(xì)胞分析，證實(shí)超過90%的細(xì)胞均為CD14–CD19–BDCA1+BDCA2+BDCA3+ （圖1A）。其中2-8%為BDCA2+CD45+漿細(xì)胞樣樹突狀細(xì)胞（pDC；圖1B），82-88%為髓樣樹突狀細(xì)胞（mDC）。mDC細(xì)胞群中有20-40%為BDCA1+CD11c+，20-40%為BDCA3+CD11c+，10-20%為CD16+CD11c+，10-25%為CD56+MHCII+，表明MagCellect Kit能夠分離zui近鑒定出的CD56+和CD16+ mDC亞群（圖1C和1D）。

賽默飛世爾公司鄭重聲明：2011年度NanoDrop品牌的2000及2000C產(chǎn)品已*給基因有限公司（Gene Company Limited）。對(duì)于市場出現(xiàn)的非基因有限公司（Gene Company Limited）經(jīng)營的本公司產(chǎn)品，本公司概不負(fù)責(zé)其儀器質(zhì)量以及相關(guān)售后服務(wù)保障。

對(duì)富集的全部DC細(xì)胞群的功能分析證實(shí)，分離出的細(xì)胞維持了在混合白細(xì)胞反應(yīng)中激活異基因T細(xì)胞增殖的能力（圖2）。由于分離出的樹突狀細(xì)胞在整個(gè)富集過程中未被抗體觸碰，所以它們有可能比用正選技術(shù)分離出的細(xì)胞保留了更多的功能特性。此外，MagCellect Kit通過兩種抗體混合物來標(biāo)記不想要的細(xì)胞，無需分離柱，比其他試劑盒更為易用。R&D Systems 新推出的MagCellect Human Blood Myeloid Dendritic Cell Isolation Kit（目錄號(hào)MAGH120）也具有類似的優(yōu)點(diǎn)。

如需了解這些試劑盒的更多信息，請(qǐng)?jiān)L問我們的 /go/CellSelection 或通過
/go/DendriticCells 了解與樹突狀細(xì)胞研究相關(guān)的其他產(chǎn)品信息。

 

圖1. 利用流式細(xì)胞儀對(duì)MagCellect Human Blood Dendritic Cell Isolation Kit分離出的樹突狀細(xì)胞進(jìn)行分析。MagCellect Human Blood Dendritic Cell Isolation Kit（目錄號(hào)MAGH110）可以富集來自人類血液樣品的所有樹突狀細(xì)胞（DC）。利用圖示的抗體通過流式細(xì)胞儀檢測不同的樹突狀細(xì)胞亞群，富集前（上圖）和富集后（下圖）。A. 利用抗CD14、抗CD19、抗CD1c/BDCA1、抗DLEC/BDCA2和抗Thrombomodulin/BDCA3抗體檢測所有樹突狀細(xì)胞。B. 利用抗DLEC/BDCA2和抗CD45抗體檢測漿細(xì)胞樣樹突狀細(xì)胞（pDC）。C. 利用抗CD56和抗MHCII抗體檢測CD56+MHCII+髓樣樹突狀細(xì)胞（mDC）。D. 利用抗CD16和抗CD11c抗體檢測CD16+CD11c+ mDC。所檢測亞群的百分比可能隨供體不同而變化。

 

圖2. 利用MagCellect Human Blood DC Isolation Kit分離的樹突狀細(xì)胞誘導(dǎo)異基因T細(xì)胞增殖。利用MagCellect Human Blood Dendritic Cell Isolation Kit（目錄號(hào)MAGH110）從人類血液中分離出樹突狀細(xì)胞。利用混合白細(xì)胞反應(yīng)分析評(píng)估這些細(xì)胞刺激異基因T細(xì)胞增殖的能力。T細(xì)胞或單獨(dú)培養(yǎng)（金線），或用分離出的樹突狀細(xì)胞連續(xù)稀釋（藍(lán)線），或以培養(yǎng)的單核細(xì)胞來源的樹突狀細(xì)胞作為陽性對(duì)照（綠線），T細(xì)胞:DC的起始比例為8:1。通過摻入3H-胸腺嘧啶脫氧核苷在3天后測定T細(xì)胞增殖。